一种革兰氏细菌的计数方法及细菌电离心皿

本技术涉及微生物测定，具体而言，涉及一种革兰氏细菌的计数方法及细菌电离心皿。

背景技术：

1、在微生物学中，活菌计数是一项广泛使用的方法。它通常基于平皿法和显微镜直接计数法进行检测。平皿法是微生物实验室中活细胞计数的金标准，但这种方法往往需要大量的实验耗材且费时费力；显微镜直接计数法直观，快捷，但是此方法程序复杂,操作繁琐,对操作人员专业性要求高。

技术实现思路

1、有鉴于此，本技术的目的在于提供一种革兰氏细菌的计数方法及细菌电离心皿，能够实现微生物中革兰氏细菌的快速计数，计数过程操作方便，效率高。

2、本技术实施例提供的一种革兰氏细菌的计数方法，所述计数方法包括：

3、在细菌电离心皿滴加ph值范围在4-5的蒸馏水；所述细菌电离心皿的中心设置有阴极电极棒，外壁周向设置多个阳性电极片，所述多个阳性电极片、阴极电极棒通过控制电路连接控制器；所述细菌电离心皿用于在控制器的控制下开启电离心模式，形成旋转电场；

4、在所述细菌电离心皿滴加待测革兰氏菌液；所述细菌电离心皿中的待测革兰氏菌液包括带负电的待测革兰氏阳性细菌和中性的待测革兰氏阴性细菌；

5、开启细菌电离心皿的电离心模式，待测革兰氏阳性细菌在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阳性细菌全部分散到细菌电离心皿外侧的阳性区域；

6、在细菌电离心皿滴加ph值为7的蒸馏水，待测革兰氏阴性细菌在所述旋转电场的作用下向所述细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阴性细菌分散到细菌电离心皿内侧的阴性区域，确定待测革兰氏菌液中的待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌分离完成；

7、用数码显微镜拍摄所述细菌电离心皿的第一阳性区域图片和第一阴性区域图片，并处理所述第一阳性区域图片和第一阴性区域图片，分别识别出待测革兰氏菌液中待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌的数量。

8、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，开启细菌电离心皿的电离心模式，包括：

9、开启细菌电离心皿的电离心模式，所述细菌电离心皿的外壁周向设置多个阳性电极片通过控制电路依次、循环的接收控制器发送的控制脉冲，形成脉冲式的旋转电场；所述旋转电场的方向为所述细菌电离心皿的径向。

10、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，在所述细菌电离心皿滴加待测革兰氏菌液，包括：

11、在所述细菌电离心皿的源菌液滴注区滴加待测革兰氏菌液；所述源菌液滴注区为环形，所述源菌液滴注区内为革兰氏标准菌液滴加区；

12、在所述细菌电离心皿的革兰氏标准菌液滴加区滴加预先制备好的标准革兰氏阳性菌液；所述标准革兰氏阳性菌液为蓝色；

13、相应的，待测革兰氏阳性细菌在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阳性细菌全部分散到细菌电离心皿外侧的阳性区域，包括：

14、所述待测革兰氏阳性细菌在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动；

15、在待测革兰氏阳性细菌内部的标准革兰氏阳性菌液在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动，形成蓝色的标准革兰氏阳性细菌环；

16、在数码显微镜在持续识别监测下，当蓝色的标准革兰氏阳性细菌环越过细菌电离心皿外侧的阳性区域的阳性标准线时，确定所述待测革兰氏阳性细菌全部分散到细菌电离心皿外侧的阳性区域。

17、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，所述待测革兰氏阳性细菌全部分散到细菌电离心皿外侧的阳性区域之后，所述计数方法还包括：

18、在所述细菌电离心皿的革兰氏标准菌液滴加区滴加预先制备好的标准革兰氏阴性菌液；所述标准革兰氏阴性菌液为红色；

19、相应的，待测革兰氏阴性细菌在所述旋转电场的作用下向所述细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阴性细菌分散到细菌电离心皿内侧的阴性区域，包括：

20、所述待测革兰氏阴性细菌在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动；

21、在待测革兰氏阴性细菌内部的标准革兰氏阴性菌液在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动，形成红色的标准革兰氏阴性细菌环；

22、在数码显微镜在持续识别监测下，当红色的标准革兰氏阴性细菌环越过细菌电离心皿内侧的阴性区域的阴性标准线时，确定所述待测革兰氏阴性细菌分散到细菌电离心皿内侧的阴性区域。

23、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，确定待测革兰氏菌液中的待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌分离完成之后，所述方法还包括：

24、停止所述细菌电离心皿的电离心模式，开启所述细菌电离心皿的竖直电场模式；所述竖直电场模式下所述细菌电离心皿通过底部的正极电极和细菌电离心皿的上方设置的负极电极形成覆盖细菌电离心皿的竖直电场；

25、在竖直电场中所述待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌平铺至所述细菌电离心皿的底部。

26、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，开启所述细菌电离心皿的竖直电场模式，包括：

27、所述细菌电离心皿的控制器通过控制电路控制正极电极、负极电极接通电源，形成竖直电场。

28、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，分别识别出待测革兰氏菌液中待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌的数量之后，所述方法还包括：

29、所述细菌电离心皿的控制器的采用预设占空比的控制信号，控制形成周期脉冲竖直电场；周期内第一时间段中脉冲竖直电场存在，第二时间段中脉冲竖直电场消失；

30、经过多个周期脉冲竖直电场消失后，用数码显微镜拍摄所述细菌电离心皿的第二阳性区域图片和第二阴性区域图片；

31、对比所述第一阳性区域图片和第二阳性区域图片、第一阴性区域图片和第二阴性区域图片中的革兰氏细菌的位置，确定革兰氏细菌的位置对比结果，并确定出待测革兰氏菌液中的活菌数量和死菌数量。

32、在一些实施例中，所述的革兰氏细菌的计数方法中，对比所述第一阳性区域图片和第二阳性区域图片、第一阴性区域图片和第二阴性区域图片中的革兰氏细菌的位置，确定革兰氏细菌的位置对比结果，并确定出待测革兰氏菌液中的活菌数量和死菌数量，包括：

33、将第一阳性区域图片和第二阳性区域图片重叠、第一阴性区域图片和第二阴性区域图片重叠，确定所述重叠后的图片中位置重合的革兰氏细菌；所述位置重合的革兰氏细菌为死菌；

34、基于位置重合的革兰氏细菌确定死菌数量，并结合所述待测革兰氏菌液中待测革兰氏阳性细菌和待测革兰氏阴性细菌的数量之和，确定活菌数量。

35、在一些实施例中，还提供一种细菌电离心皿，所述细菌电离心皿的中心设置有阴极电极棒，所述细菌电离心皿的外壁周向设置有多个阳性电极片；

36、所述细菌电离心皿还包括控制电路和控制器，所述多个阳性电极片、阴极电极棒通过控制电路连接控制器；

37、所述细菌电离心皿在控制器的控制下开启电离心模式，形成旋转电场。

38、在一些实施例中，所述细菌电离心皿的底部设置有正极电极，细菌电离心皿的上方设置有负极电极；所述正极电极和负极电极通过控制电路连接控制器；

39、所述细菌电离心皿在控制器的控制下形成覆盖所述细菌电离心皿的竖直电场。

40、本技术实施例中，提供一种革兰氏细菌的计数方法及细菌电离心皿，所述计数方法利用细菌电离心皿提供旋转电场，通过调节细菌电离心皿中待测革兰氏菌液的ph值，使得所述细菌电离心皿中的待测革兰氏菌液包括带负电的待测革兰氏阳性细菌和中性的待测革兰氏阴性细菌，待测革兰氏阳性细菌在所述旋转电场的作用下向细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阳性细菌全部分散到细菌电离心皿外侧的阳性区域；然后调整细菌电离心皿中待测革兰氏菌液的ph值，使得待测革兰氏阴性细菌带负电，待测革兰氏阴性细菌在所述旋转电场的作用下向所述细菌电离心皿的边界扩散运动，直至所述待测革兰氏阴性细菌分散到细菌电离心皿内侧的阴性区域，确定待测革兰氏菌液中的待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌分离完成；用数码显微镜拍摄所述细菌电离心皿的第一阳性区域图片和第一阴性区域图片，并处理所述第一阳性区域图片和第一阴性区域图片，从而自动识别出待测革兰氏菌液中待测革兰氏阳性细菌、待测革兰氏阴性细菌的数量，实现微生物中革兰氏细菌的快速计数，整个计数过程操作方便，程序简单，对操作人员专业性要求低，计数过程直观。