双特异性抗体及其用途的制作方法

本公开涉及双特异性抗体或其抗原结合片段。

背景技术：

1、双特异性抗体是可以同时结合两种不同类型的抗原或两种不同表位的人工蛋白质。这种双重特异性打开了广泛的应用领域，包括将t细胞重定向至肿瘤细胞，同时阻断两个不同的信号传导途径，双重靶向不同的疾病介体以及将药物(payload)递送至靶向部位。卡妥索单抗(catumaxomab)(抗epcam和抗cd3)和博纳吐单抗(blinatumomab)(抗cd19和抗cd3)的批准已成为开发双特异性抗体的重要里程碑。

2、由于双特异性抗体具有各种应用，因此需要继续开发基于双特异性抗体的各种治疗剂。

技术实现思路

1、本公开涉及不平衡的双特异性抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体或抗原结合片段以不同的结合亲和力特异性结合两种不同抗原。

2、在一些方面，本公开涉及一种双特异性抗体或抗原结合片段，包括：第一重链可变区、第二重链可变区、第一轻链可变区、和第二轻链可变区，其中，所述第一重链可变区和所述第一轻链可变区彼此缔合，形成第一抗原结合区，所述第一抗原结合区以大于107m-1、108m-1、109m-1、1010m-1、1011m-1、或1012m-1的结合亲和力特异性结合第一抗原，并且所述第二重链可变区和所述第二轻链可变区彼此缔合，形成第二抗原结合区，所述第二抗原结合区以小于109m-1、108m-1、107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合第二抗原。

3、在一些实施方案中，所述第二抗原结合区以大于107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合所述第二抗原。

4、在一些实施方案中，所述第一抗原结合区结合所述第一抗原时的结合亲和力比所述第二抗原结合区结合所述第二抗原时的结合亲和力大至少100倍、1000倍或10000倍。

5、在一些实施方案中，所述第一轻链可变区和所述第二轻链可变区至少90％、95％、99％或100％相同。

6、在一些方面，本公开涉及一种双特异性抗体或抗原结合片段，包括：包含第一重链可变区和第一轻链可变区的第一臂，包含第二重链可变区和第二轻链可变区的第二臂；其中所述第一臂以大于107m-1、108m-1、109m-1、1010m-1、1011m-1、或1012m-1的结合亲和力特异性结合第一抗原，并且所述第二臂以小于109m-1、108m-1、107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合第二抗原。

7、在一些实施方案中，所述第二臂以大于107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合所述第二抗原。

8、在一些实施方案中，所述第一臂结合所述第一抗原时的结合亲和力比所述第二臂结合所述第二抗原时的结合亲和力大至少100倍、1000倍或10000倍。

9、在一些实施方案中，所述第一轻链可变区和所述第二轻链可变区至少90％、95％、99％或100％相同。

10、在一些方面，本公开涉及一种双特异性抗体或抗原结合片段，其包含：含有第一重链可变区的第一重链、含有第二重链可变区的第二重链、含有第一轻链可变区的第一轻链、和含有第二轻链可变区的第二轻链，其中，所述第一重链可变区和所述第一轻链可变区彼此缔合，形成第一抗原结合区，所述第一抗原结合区以大于107m-1、108m-1、109m-1、1010m-1、1011m-1、或1012m-1的结合亲和力特异性结合第一抗原，并且所述第二重链可变区和所述第二轻链可变区彼此缔合，形成第二抗原结合区，所述第二抗原结合区以小于109m-1、108m-1、107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合第二抗原。

11、在一些实施方案中，所述第二抗原结合区以大于107m-1、106m-1、105m-1、或104m-1的结合亲和力特异性结合所述第二抗原。

12、在一些实施方案中，所述第一抗原结合区结合所述第一抗原时的结合亲和力比所述第二抗原结合区结合所述第二抗原时的结合亲和力大至少100倍、1000倍或10000倍。

13、在一些实施方案中，所述第一轻链和所述第二轻链至少90％，95％，99％或100％相同。

14、在一些实施方案中，所述第一重链和第二链通过杵臼结构的方式彼此缔合。

15、在一些实施方案中，所述第一抗原是癌症特异性抗原，并且所述第二抗原是cd3。

16、在一些实施方案中，所述第一抗原是cd20，并且所述第二抗原是cd3。

17、在一些实施方案中，所述第一重链可变区包含与seq id no：1至少80％、85％、90％或95％相同的序列，所述第二重链可变区包含与seq id no：2至少80％、85％、90％或95％相同的序列，并且所述第一和第二轻链可变区包含与seq id no：3至少80％、85％、90％或95％相同的序列。

18、在一些实施方案中，所述第一抗原是癌症特异性抗原，并且所述第二抗原是癌症相关抗原。

19、在一些实施方案中，所述第一抗原是pd-l1，所述第二抗原是cd55。

20、在一些实施方案中，所述第一重链可变区包含与seq id no：4至少80％、85％、90％或95％相同的序列，所述第二重链可变区包含与seq id no：5至少80％、85％、90％或95％相同的序列，并且所述第一和第二轻链可变区包含与seq id no：6或seq id no：7至少80％、85％、90％或95％相同的序列。

21、在一些方面，本公开涉及一种制备双特异性抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括：选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；确定vha、vla、vhb和vlb的氨基酸序列；比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性大于80％；设计共同的轻链可变区(vlc)，其中当vlc与vha缔合时，所述vlc保持对所述第一抗原的亲和力；重新设计vha和vhb序列，从而获得vha'和vhb'，以增加第一蛋白质和第二蛋白质之间的生物化学或生物物理特征的差异，其中所述第一蛋白质包含两个各自含有vha'的多肽和两个各自含有vlc的多肽，并且所述第二蛋白质包含两个各自含有vhb'的多肽和两个各自含有vlc的多肽；产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述两个轻链可变区各自包含vlc，并且所述两个重链可变区分别包含vha'和vhb'。

22、在一些实施方案中，在步骤(d)中，vlc-vhb与所述第二抗原的结合亲和力可以降低。

23、在一些实施方案中，该方法进一步包括开发缓冲液系统以纯化所述双特异性抗体或其抗原结合片段。

24、在一些方面，本公开涉及一种制备双特异性抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括：选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；确定vha、vla和vlb的氨基酸序列；比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性小于80％；用vla替换噬菌体展示抗体文库中的所有轻链可变区，并针对所述第二抗原进行淘选以获得第三重链可变区(vhc)；重新设计vha和vhc序列，从而获得vha'和vhc'，以增加第一蛋白质和第二蛋白质之间的生物化学或生物物理特征的差异，其中所述第一蛋白质包含两个各自含有vha'的多肽和两个各自含有vla的多肽，并且所述第二蛋白质包含两个各自含有vhc'的多肽和两个各自含有vla的多肽；产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述两个轻链可变区各自包含vla，并且所述两个重链可变区分别包含vha'和vhc'。

25、在一些实施方案中，该方法进一步包括开发缓冲液系统以纯化所述双特异性抗体或其抗原结合片段。

26、在一些方面，本公开涉及一种制备双特异性抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括：选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；确定vha、vla、vhb和vlb的氨基酸序列；比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性小于80％；用多个轻链可变区替换噬菌体展示抗体文库中的所有轻链可变区，其中所述轻链可变区与vla或vlb至少80％、85％、90％、95％或99％相同；针对所述第二抗原进行淘选；选择共同的轻链可变区(vlc)和第三重链可变区(vhc)，其中vha-vlc以期望的亲和力结合所述第一抗原并且vhc-vlc以期望的亲和力结合所述第二抗原；重新设计vha和vhc序列，从而获得vha'和vhc'，以增加第一蛋白质和第二蛋白质之间的生物化学或生物物理特征的差异，其中所述第一蛋白质包含两个各自含有vha'的多肽和两个各自含有vlc的多肽，并且所述第二蛋白质包含两个各自含有vhc'的多肽和两个各自含有vlc的多肽；产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述两个轻链可变区各自包含vlc，并且所述两个重链可变区分别包含vha'和vhc'。

27、在一些实施方案中，在步骤(d)中，所述多个轻链可变区是通过易错pcr产生的。

28、在一些实施方案中，该方法进一步包括开发缓冲系统以纯化所述双特异性抗体或其抗原结合片段。

29、一方面，本公开提供了制备双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。该方法涉及以下一个或多个步骤：

30、(a)选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；

31、(b)确定vha、vla、vhb和vlb的氨基酸序列；

32、(c)比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性小于80％；

33、(d)用多个轻链可变区替换噬菌体展示抗体文库中的所有轻链可变区。在一些实施方案中，所述轻链可变区与vla或vlb至少80％、85％、90％、95％或99％相同；

34、(e)针对所述第二抗原进行淘选；

35、(f)选择共同的轻链可变区(vlc)和第三重链可变区(vhc)。在一些实施方案中，vhc-vlc以期望的亲和力与所述第二抗原结合；

36、(g)确定vla与vlc之间的同源性大于80％；

37、(h)设计共同的轻链可变区(vld)。在一些实施方案中，当所述vld与vha缔合时，所述vld保持对所述第一抗原的亲和力，而且当所述vld与vhc缔合时，所述vld对所述第二抗原具有期望的亲和力；

38、(i)任选地，重新设计vha和vhc序列，从而获得vha'和vhc'，以增加第一蛋白质和第二蛋白质之间的生物化学或生物物理特征的差异，其中所述第一蛋白质包含两个各自含有vha'的多肽和两个各自含有vld的多肽，并且所述第二蛋白质包含两个各自含有vhc'的多肽和两个各自含有vld的多肽；并且

39、(j)任选地，产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述两个轻链可变区各自包含vld，并且所述两个重链可变区分别包含vha'和vhc'。

40、一方面，本公开提供了制备双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。该方法涉及以下一个或多个步骤：

41、(a)选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；

42、(b)确定vha、vla、vhb和vlb的氨基酸序列；

43、(c)比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性大于80％；

44、(d)设计共同的轻链可变区(vlc)。在一些实施方案中，当所述vlc与vha缔合时，所述vlc保持对所述第一抗原的亲和力；并且

45、(e)任选地，产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述两个轻链可变区各自包含vlc，并且所述两个重链可变区分别包含vha和vhb。

46、一方面，本公开还提供了制备双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。该方法涉及以下一个或多个步骤：

47、(a)选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；

48、(b)确定vha、vla和vlb的氨基酸序列；

49、(c)比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性小于80％；

50、(d)用所述vla替换噬菌体展示抗体文库中的所有轻链可变区，并针对所述第二抗原进行淘选，以获得第三重链可变区(vhc)；并且

51、(e)任选地，产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述两个轻链可变区各自包含vla，并且所述两个重链可变区分别包含vha和vhc。

52、一方面，本公开进一步提供了制备双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。该方法涉及以下一个或多个步骤：

53、(a)选择第一抗原和第二抗原，并鉴定与所述第一抗原结合的第一抗体或其抗原结合片段以及与所述第二抗原结合的第二抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区(vha)和第一轻链可变区(vla)，并且所述第二抗体或其抗原结合片段包含第二重链可变区(vhb)和第二轻链可变区(vlb)；

54、(b)确定vha、vla、vhb和/或vlb的氨基酸序列；

55、(c)比对vla和vlb的氨基酸序列，并确定vla和vlb之间的序列同源性小于80％；

56、(d)用多个轻链可变区替换噬菌体展示抗体文库中的所有轻链可变区。在一些实施方案中，所述轻链可变区与vla或vlb至少80％、85％、90％、95％或99％相同；

57、(e)针对所述第一和/或第二抗原进行淘选；

58、(f)选择共同的轻链可变区(vlc)和第三重链可变区(vhc)。在一些实施方案中，vha-vlc以期望的亲和力结合所述第一抗原，并且vhc-vlc以期望的亲和力结合所述第二抗原；并且

59、(g)任选地，产生具有两个轻链可变区和两个重链可变区的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述两个轻链可变区各自包含vlc，并且所述两个重链可变区分别包含vha和vhc。

60、在另一方面，本公开内容提供了与cd3结合的抗体或其抗原结合片段，包括：包含互补决定区(cdr)1、2和3的重链可变区(vh)，其中vh cdr1区包含与选定的vh cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vh cdr2区包含与选定的vh cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vh cdr3区包含与选定的vh cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；以及包含cdr 1、2和3的轻链可变区(vl)，其中vl cdr1区包含与选定的vl cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vl cdr2区包含与选定的vl cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vl cdr3区包含与选定的vl cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的vh cdr 1、2和3氨基酸序列和所述选定的vl cdr 1、2和3氨基酸序列为以下中的一者：所述选定的vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：22-24所示，并且所述选定的vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：28-30所示。

61、在一些实施方案中，所述vh包含具有分别如seq id no：22、23、24所示的氨基酸序列的cdr 1、2、3，并且所述vl包含具有分别如seq id no：28、29、30所示的氨基酸序列的cdr1、2、3。

62、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人cd3。

63、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。

64、在另一方面，本公开还提供了与pd-l1结合的抗体或其抗原结合片段，其包括：包含互补决定区(cdr)1、2和3的重链可变区(vh)，其中vh cdr1区包含与选定的vh cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vh cdr2区包含与选定的vh cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vh cdr3区包含与选定的vh cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；以及包含cdr 1、2和3的轻链可变区(vl)，其中vl cdr1区包含与选定的vl cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vl cdr2区包含与选定的vl cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vl cdr3区包含与选定的vl cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的vh cdr 1、2和3氨基酸序列以及所述选定的vl cdr 1、2和3氨基酸序列是以下之一：

65、(1)所述选定的vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：41-43所示，并且所述选定的vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：53-55所示；

66、(2)所述选定的vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：41-43所示，并且所述选定的vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：59-61所示。

67、在一些实施方案中，所述vh包含具有分别如seq id no：41-43所示的氨基酸序列的cdr 1、2、3，并且所述vl包含具有分别如seq id no：59-61所示的氨基酸序列的cdr 1、2、3。

68、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与人cd3特异性结合。

69、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。

70、在另一方面，本公开内容提供了与cd55结合的抗体或其抗原结合片段，其包括：

71、包含互补决定区(cdr)1、2和3的重链可变区(vh)，其中vh cdr1区包含与选定的vhcdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vh cdr2区包含与选定的vh cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vh cdr3区包含与选定的vh cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；以及包含cdr 1、2和3的轻链可变区(vl)，其中vl cdr1区包含与选定的vlcdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，vl cdr2区包含与选定的vl cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且vl cdr3区包含与选定的vl cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述选定的vh cdr 1、2和3氨基酸序列以及所述选定的vl cdr 1、2和3氨基酸序列是以下之一：

72、(1)所述选定的vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：47-49所示，并且所述选定的vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：53-55所示；

73、(2)所述选定的vh cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：47-49所示，并且所述选定的vl cdr 1、2、3氨基酸序列分别如seq id no：59-61所示。

74、在一些实施方案中，所述vh包含具有分别如seq id no：47-49所示的氨基酸序列的cdr 1、2、3，并且所述vl包含具有分别如seq id no：59-61所示的氨基酸序列的cdr 1、2、3。

75、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与人cd3特异性结合。

76、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。

77、在一个方面，本公开内容提供了一种核酸，该核酸包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含：包含含有cdr 1、2和3的vl的免疫球蛋白轻链或其片段，所述cdr 1、2和3分别包含如seq id no：53-55所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，当所述vl与如包含seq idno：4所示的氨基酸序列的vh配对时，所述vl结合pd-l1，和/或当所述vl与包含如seq idno：5所示的氨基酸序列的vh配对时，所述vl结合cd55。

78、在一个方面，本公开内容提供了一种核酸，其包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含：包含含有cdr 1、2和3的vl的免疫球蛋白轻链或其片段，所述cdr 1、2和3分别包含如seq id no：59-61所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，当所述vl与如包含seq id no：4所示的氨基酸序列的vh配对时，所述vl结合pd-l1，和/或当所述vl与包含如seq id no：5所示氨基酸序列的vh配对时，所述vl结合cd55。

79、在一些实施方案中，所述核酸编码双特异性抗体。在一些实施方案中，核酸是cdna。

80、一方面，本公开提供了包含一种或多种本文所述核酸的载体。

81、一方面，本公开提供了一种包含本文所述载体的细胞。在一些实施方案中，该细胞是cho细胞。

82、一方面，本公开提供了一种细胞，其包含本文所述的一种或多种核酸。

83、在一个方面，本公开内容提供了与cd20和cd3结合的双特异性抗体或其抗原结合片段，包含：含有第一重链可变区(vh)的第一多肽，所述第一重链可变区包含与seq id no：1至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第二重链可变区(vh)的第二多肽，所述第二重链可变区包含与seq id no：2至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第一轻链可变区(vl)的第三多肽，所述第一轻链可变区包含与seq id no：3至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第二轻链可变区(vl)的第四多肽，所述第二轻链可变区包含与seq id no：3至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

84、在一些实施方案中，所述第一重链可变区(vh)包含seq id no：1；所述第二重链可变区(vh)包含seq id no：2；所述第一轻链可变区(vl)包含seq id no：3；并且所述第二轻链可变区(vl)包含seq id no：3。

85、在一些实施方案中，所述第一多肽包含与seq id no：34、35或36至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；所述第二多肽包含与seq id no：37、38或39至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；所述第三多肽包含与seq id no：40至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；并且所述第四多肽包含与seq id no：40至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

86、在一些实施方案中，所述第一多肽包含seq id no：35所示的氨基酸序列；并且所述第二多肽包含seq id no：38所示的氨基酸序列。

87、在一个方面，本公开内容提供了一种结合pd-l1和cd55的双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含：含有第一重链可变区(vh)的第一多肽，所述第一重链可变区包含与seqid no：4至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第二重链可变区(vh)的第二多肽，所述第二重链可变区包含与seq id no：5至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第一轻链可变区(vl)的第三多肽，所述第一轻链可变区包含与seq id no：6或7至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；含有第二轻链可变区(vl)的第四多肽，所述第二轻链可变区包含与seq id no：6或7至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

88、在一些实施方案中，所述第一重链可变区(vh)包含seq id no：4；所述第二重链可变区(vh)包含seq id no：5；所述第一轻链可变区(vl)包含seq id no：7；并且所述第二轻链可变区(vl)包含seq id no：7。

89、在一些实施方案中，所述第一多肽包含与seq id no：65至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；所述第二多肽包含与seq id no：66至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；所述第三多肽包含与seq id no：67或68至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；并且所述第四多肽包含与seq idno：67或68至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

90、在一些实施方案中，所述第一多肽包含seq id no：65所示的氨基酸序列；所述第二多肽包含seq id no：66所示的氨基酸序列；所述第三多肽包含seq id no：68所示的氨基酸序列；并且所述第四多肽包含seq id no：68所示的氨基酸序列。

91、一方面，本公开提供了抗体-药物缀合物，其包含与治疗剂共价结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，治疗剂是细胞毒性剂或细胞抑制剂。

92、一方面，本公开提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法。所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含本文所述的抗体或其抗原结合片段的组合物或本文所述的抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者患有实体瘤。在一些实施方案中，癌症是黑素瘤、胰腺癌或血液系统恶性肿瘤。在一些实施方案中，癌症是非霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤或慢性淋巴细胞性白血病。

93、一方面，本公开提供了一种降低肿瘤生长速率的方法。该方法包括：对于受试者，使肿瘤细胞接触有效量的包含本文所述的抗体或其抗原结合片段的组合物或者本文所述的抗体-药物缀合物。

94、一方面，本公开提供了一种杀伤肿瘤细胞的方法。该方法包括：对于受试者，使肿瘤细胞接触有效量的包含本文所述的抗体或其抗原结合片段的组合物或者本文所述的抗体-药物缀合物。

95、一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。

96、一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文所述的抗体药物缀合物和药学上可接受的载体。

97、除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；也可以使用本领域已知的其他合适方法和材料。材料、方法和示例仅是说明性的，并不旨在于限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献均通过引用全文并入本文。在发生冲突的情况下，以本说明书包括定义为准。

98、根据以下详细描述和附图以及权利要求，本发明的其他特征和优点将变得显而易见。