一种N1,N10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法及其应用

本发明属于生物，尤其涉及一种n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法及其应用。

背景技术：

1、缺血性心脏病(ihd)是人类死亡的主要原因之一。血管成形术和冠状动脉搭桥手术等治疗可以恢复缺血心肌的血流。然而，再灌注通过升高活性氧(ros)和诱导钙超载会导致额外的心肌损伤。目前，还没有有效的治疗缺血/再灌注(i/r)损伤的方法。从天然产物中寻找对心肌缺血再灌注损伤具有保护或预防作用的活性单体成分成为目前研究热点。

2、黑果枸杞(lycium ruthenicummurr.)，藏药中又称为“旁玛”，是茄科枸杞属多年生灌木，其生命力强，能耐盐、耐寒、抗旱，主要分布于高山沙林地带。黑果枸杞被收载于《晶珠本草》《四部医典》等藏医药经典著作中，其味甘、性平、清心热，是一种药食两用植物。黑果枸杞中富含亚精胺生物碱成分，具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗ad、抗抑郁、抗衰老等多种生理活性，是一类值得关注和深入研究的资源性化学物质。n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺是黑果枸杞中主要的亚精胺生物碱成分，目前无相关的制备工艺及心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究报道，如何制备得到高纯度的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺并探索其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法，能够提取到高纯度的黑果枸杞亚精胺成分n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺。

2、本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备所得的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺在制备防治缺血再灌注损伤产品中的应用，本发明提供的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺能够有效防治心肌缺血再灌注损伤。

3、本发明提供了一种n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法，包括以下步骤：

4、黑果枸杞汁离心，收集上清液；

5、将所述上清液加入大孔树脂柱1中上样，用水洗脱大孔树脂柱1，弃去流出液；用体积分数为5％～15％的乙醇溶液洗脱大孔树脂柱1，收集流出液，将流出液加入大孔树脂柱2中上样；用体积分数为5％～15％的乙醇溶液洗脱大孔树脂柱2，收集流出液，浓缩，干燥得到黑果枸杞亚精胺精提物；

6、将黑果枸杞亚精胺精提物用制备液相色谱纯化，得到n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺。

7、优选的，所述大孔树脂柱1的型号包括：d101、hpd-100、hpd-450、hpd-750、ab-8或s-8。

8、优选的，所述大孔树脂柱2的型号包括：d301r、d301、d296、d315或d201。

9、优选的，用水洗脱时，水的体积为1～3bv。

10、优选的，用乙醇溶液洗脱大孔树脂柱1时，乙醇溶液的体积为1～5bv。

11、优选的，用乙醇溶液洗脱大孔树脂柱2时，乙醇溶液的体积为1～5bv。

12、优选的，洗脱大孔树脂柱1时的洗脱流速为2～4bv/h，洗脱大孔树脂柱2的洗脱流速为1～3bv/h。

13、优选的，所述制备液相色谱纯化的条件为：色谱柱为c18色谱柱，流动相为体积分数5％～20％的乙腈溶液，检测波长为280nm。

14、优选的，所述流动相洗脱时为等度洗脱，所述流动相的流速为2～20ml/min。

15、本发明还提供了所述制备方法制备得到的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺在制备防治缺血再灌注损伤产品中的应用。

16、本发明的有益效果：

17、本发明提供了一种n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法，经水提、大孔树脂分离、制备液相色谱纯化，得到高纯度的黑果枸杞亚精胺成分n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺，其纯度达到98％以上。制备得到的高纯度n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺可直接激活g6pd活性，提高nadph水平，剂量依赖性改善心脏功能，降低瘢痕组织的形成、纤维化，在高剂量(20mg/kg/day)下，本发明制备得到的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺对心肌缺再灌注损伤的保护作用与酒石酸美托洛尔(mta)相当，可用于制备防治缺血再灌注损伤的产品。

1.一种n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂柱1的型号包括：d101、hpd-100、hpd-450、hpd-750、ab-8或s-8。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂柱2的型号包括：d301r、d301、d296、d315或d201。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用水洗脱时，水的体积为1～3bv。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用乙醇溶液洗脱大孔树脂柱1时，乙醇溶液的体积为1～5bv。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用乙醇溶液洗脱大孔树脂柱2时，乙醇溶液的体积为1～5bv。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，洗脱大孔树脂柱1时的洗脱流速为2～4bv/h，洗脱大孔树脂柱2的洗脱流速为1～3bv/h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备液相色谱纯化的条件为：色谱柱为c18色谱柱，流动相为体积分数5％～20％的乙腈溶液，检测波长为280nm。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述流动相洗脱时为等度洗脱，所述流动相的流速为2～20ml/min。

10.权利要求1～9任意一项所述制备方法制备得到的n1,n10-双二氢二咖啡酰基亚精胺在制备防治缺血再灌注损伤产品中的应用。