一种痂状炭角菌及其无菌子囊果培养方法与流程

本发明属于药用真菌开发利用，更具体地说，本发明涉及一种痂状炭角菌及其无菌子囊果培养方法。

背景技术：

1、痂状炭角菌(xylaria escharoidea)，是生长在白蚁巢穴基物上的一种野生真菌，分布于中国南方各地，数量稀少。炭角菌属(xylaria hill ex shrank)的分类学地位属于真菌界fungi，子囊菌门ascomycota，盘菌亚门pezizomycotina，粪壳菌纲sordariomycetes，炭角菌亚纲xylariomycetidae，炭角菌目xylariales，炭角菌科xylariaceae。

2、炭角菌是一类食药用菌，具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤、抗抑郁、酶抑制和免疫调节等多种药理活性，有很大的药用开发潜力。炭角菌生态类型特殊，大多数物种是植物内生菌，还有很多物种生长在由植物残体与土壤构成的白蚁废巢中，子囊果难发现。炭角菌在野生环境下，子囊果在植物活体接近死亡或已经死亡后才会发现，且子囊果细小，生物量少，很难进行开发利用。

3、痂状炭角菌的子囊果人工培养难度较大，自然生长周期达5-7个月，开放式培养子囊果极易受到虫害、病害，无法形成完全成熟的子囊果，故建立痂状炭角菌无菌子囊果的人工培养方法具有重要的应用前景。

技术实现思路

1、本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

2、为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种痂状炭角菌，其分类命名为xylaria escharoidea xe-tl2301，已于2024年07月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为cgmcc no.41417。

3、优选的是，所述痂状炭角菌的its1序列如seq id no.1所示。

4、优选的是，所述痂状炭角菌的采集、分离、纯化的方法为：

5、9～10月在野外采集成熟痂状炭角菌新鲜子囊果标本，用报纸或餐巾纸包裹，常温、通风条件下运送回实验室；

6、用无菌刀片剖开子囊果，切取菌柄中央的3～5×3～5×3～5mm大小的菌肉，放在pda斜面培养基中22～25℃避光培养2～3d，当菌肉组织边缘长出2～3cm菌丝后，挑取边缘小块菌丝转接到新的pda斜面培养基中，继续培养，如此转接2～4次，得到纯化的菌种，0～4℃保存备用。

7、一种如上所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，包括以下步骤：

8、步骤一、栽培种生产：制备麦粒培养基，在无菌条件下接种痂状炭角菌，培养得到栽培种；

9、步骤二、制备子囊果培养料：以阔叶树木屑或松木屑、棉籽壳、玉米芯、麸皮、石灰、石膏、碳酸钙、过磷酸钙为原料制备得到子囊果培养料；

10、步骤三、装料：将子囊果培养料装入子囊果培养容器中，高压灭菌，自然冷却；

11、步骤四、接种：将栽培种接入步骤三装料后的子囊果培养容器中；

12、步骤五、菌丝体培养：把接种后的子囊果培养容器放入培养室中，培养室和容器表面用70％乙醇溶液喷洒1～2次，在22～25℃避光培养7～10d；

13、步骤六、无菌子囊果培养：继续在温度5～30℃、空气相对湿度60～80％条件下避光培养60～120d，形成黑色坚硬的无菌子囊果，培养期间每隔7～10d用70％乙醇溶液喷洒培养室和容器表面，诱虫灯诱杀培养室内的昆虫；

14、步骤七、采收：采收子囊果，去掉菌柄基部的培养料残留物，烘干、包装；

15、步骤八、储存：将包装好的无菌子囊果放于0～4℃冷库中保存。

16、优选的是，所述步骤一中，麦粒培养基的制备方法为：干小麦在沸水中煮20～30min，使干湿比达到1:1.7～1.8，捞起沥干明水，加入石灰、石膏、碳酸钙和过磷酸钙，搅拌均匀后装入容器中，用聚丙烯薄膜封口，在0.12～0.14mpa、121℃高压灭菌30～40min，自然冷却，得到麦粒培养基。

17、优选的是，所述麦粒培养基中，小麦为96wt％，石灰、石膏、碳酸钙、过磷酸钙各1wt％。

18、优选的是，所述麦粒培养基容器包括但不限于250～500ml三角瓶、750～1000ml菌种瓶。

19、优选的是，所述步骤一中，培养为：在22～25℃避光培养5～7d，菌丝体长满麦粒培养基，容器口有大量白色气生菌丝体或菌索。

20、优选的是，所述步骤二中，子囊果培养料的制备方法为：阔叶树木屑或松木屑、棉籽壳、玉米芯按任意比例混合共76wt％，麸皮20wt％，石灰、石膏、碳酸钙、过磷酸钙各1wt％，称取原料，加水拌料，料水比为1:1.2～1.4，搅拌均匀，得到子囊果培养料，其ph自然，含水量62～65％。

21、优选的是，所述步骤三中，子囊果培养容器为高30～50cm、边长10～30cm的方形玻璃或聚丙烯容器，或者高30～50cm、直径10～30cm的圆形玻璃或聚丙烯容器。

22、优选的是，所述步骤三中，装料的具体方法为：将子囊果培养料装入子囊果培养容器中，装料量为容器总高度的1/5～1/4，压实培养料，料中央打一个直径1～3cm的接种孔，擦干净装料后的容器内壁，采用聚丙烯膜和报纸封口，0.12～0.14mpa、121℃高压灭菌60～70min，自然冷却。

23、优选的是，所述步骤四中，接种的具体方法为：在无菌条件下将栽培种接入子囊果培养容器的接种孔中，盖上培养料。

24、优选的是，所述步骤七中，烘干为在60～65℃烘箱中烘6～8h；包装为放入聚乙烯包装袋内，密封。

25、本发明至少包括以下有益效果：本发明从自然界中分离筛选出一株痂状炭角菌xe-tl2301，该菌株可用于人工培养子囊果；同时，本发明提供了一种痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，该方法简单、成本低，生长周期短，解决了现有痂状炭角菌的子囊果人工培养难度较大、自然生长周期长、易受到虫害、病害等问题，本发明采用阔叶树木屑或松木屑、棉籽壳、玉米芯等原料为培养料，干子囊果的生物学效率为1～3％，得到的子囊果可长期保存，为痂状炭角菌无菌子囊果的人工培养提供了新的方法。

26、本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

1.一种痂状炭角菌，其特征在于，其分类命名为xylaria escharoidea xe-tl2301，已于2024年07月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为cgmcc no.41417。

2.如权利要求1所述的痂状炭角菌，其特征在于，所述痂状炭角菌的its1序列如seq idno.1所示。

3.一种如权利要求1所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.如权利要求3所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤一中，麦粒培养基的制备方法为：干小麦在沸水中煮20～30min，使干湿比达到1:1.7～1.8，捞起沥干明水，加入石灰、石膏、碳酸钙和过磷酸钙，搅拌均匀后装入容器中，用聚丙烯薄膜封口，在0.12～0.14mpa、121℃高压灭菌30～40min，自然冷却，得到麦粒培养基。

5.如权利要求4所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述麦粒培养基中，小麦为96wt％，石灰、石膏、碳酸钙、过磷酸钙各1wt％。

6.如权利要求4所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤一中，培养为：在22～25℃避光培养5～7d，菌丝体长满麦粒培养基，容器口有大量白色气生菌丝体或菌索。

7.如权利要求3所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤二中，子囊果培养料的制备方法为：阔叶树木屑或松木屑、棉籽壳、玉米芯按任意比例混合共76wt％，麸皮20wt％，石灰、石膏、碳酸钙、过磷酸钙各1wt％，称取原料，加水拌料，料水比为1:1.2～1.4，搅拌均匀，得到子囊果培养料，其ph自然，含水量62～65％。

8.如权利要求3所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤三中，子囊果培养容器为高30～50cm、边长10～30cm的方形玻璃或聚丙烯容器，或者高30～50cm、直径10～30cm的圆形玻璃或聚丙烯容器；装料的具体方法为：将子囊果培养料装入子囊果培养容器中，装料量为容器总高度的1/5～1/4，压实培养料，料中央打一个直径1～3cm的接种孔，擦干净装料后的容器内壁，采用聚丙烯膜和报纸封口，0.12～0.14mpa、121℃高压灭菌60～70min，自然冷却。

9.如权利要求8所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤四中，接种的具体方法为：在无菌条件下将栽培种接入子囊果培养容器的接种孔中，盖上培养料。

10.如权利要求3所述的痂状炭角菌的无菌子囊果培养方法，其特征在于，所述步骤七中，烘干为在60～65℃烘箱中烘6～8h；包装为放入聚乙烯包装袋内，密封。