一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法与流程

本发明属于化学分析，具体涉及一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法。

背景技术：

1、本发明涉及的2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的化学结构如下：

2、，其cas号为2968523-32-0，是一种可作用于hipk2靶点抗肾纤维化，减轻肾损伤和肾间质纤维化沉积的创新药物。

3、原料药是药品生产的起始物料，其质量直接影响到后续制剂的生产和最终产品的质量。通过药品生产和研发过程中重视并加强含量检测工作，可以确保原料药的纯度、均一性和稳定性，从而满足药品生产的质量要求，保障患者用药安全以及药物疗效发挥。

4、然而，目前仅在专利cn118707005a中公开了一种通过液相色谱-串联质谱法对血浆中2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物浓度的检测方法，其主要利用已知浓度的内标物（非那雄胺）与已知浓度的2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物之间的相应关系，并由已知浓度的非那雄胺得到血浆中未知的 2,4-二取代-5- 氟嘧啶衍生物的浓度/含量。仍未有相关文献和专利报道对2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物原料药中药物含量/纯度的检测方法。因此，需要开发一种具有较好的专属性和系统适应性的含量分析方法，确保主峰与相邻峰较好分离以适用于该2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的准确分析。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法，通过高效液相色谱法对所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物进样分析，以便获得色谱图，以及基于所述色谱图确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：

4、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，

5、检测波长：254nm，

6、柱温：30~35℃，

7、流动相a：ph2.5磷酸盐缓冲液和体积比为0.15%三氟乙酸的混合溶液，

8、流动相b：乙腈，

9、流速：0.8~1.0ml/min，

10、洗脱梯度为：

11、，

12、运行时间：50min。

13、在一些实施方式中，为保证主成分峰（即主峰）与干扰峰的有效分离以及较好的主峰峰型，所述色谱柱为ymc-pack pro c18，150mm×4.6mm，3μm，或waters sunfire c18，150mm×4.6mm，3.5μm。

14、在一些实施方式中，为减少分析过程中鬼峰干扰，增加捕集小柱：ghost -snipercolumn，50mm×4.6mm。

15、在一些实施方式中，所述进样分析的进样量为10μl。

16、在一些实施方式中，所述流动相a中磷酸盐为磷酸氢二钾。

17、在一些实施方式中，所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物甲醇溶液，并且基于每毫升供试品溶液，其中2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的浓度约为0.1mg/ml。

18、在一些实施方式中，基于所述色谱图确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量，是根据色谱图得到的供试品溶液和对照品溶液的色谱峰面积，按照外标法计算确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量。

19、本发明还进一步提供了一种更具体的2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法，包括：

20、（1）色谱条件

21、色谱柱：ymc-pack pro c18，150mm×4.6mm，3μm，

22、捕集小柱：ghost -sniper column，50mm×4.6mm，

23、检测器：pda检测器（即photo-diode array检测器，二极管阵列检测器），

24、检测波长：254nm，

25、柱温：35℃，

26、流动相a：ph2.5磷酸氢二钾缓冲液和体积比为0.15%三氟乙酸的混合溶液，

27、流动相b：乙腈，

28、流速：0.8ml/min，

29、洗脱梯度为：

30、，

31、运行时间：50min，

32、进样量：10μl；

33、（2）稀释剂

34、即空白溶液，为甲醇；

35、（3）配制供试品溶液

36、取一定量2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物，精密称定，加稀释剂溶解并稀释配制浓度约0.1mg/ml，即得；

37、（4）配制对照品溶液

38、取2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物对照品，精密称定，加稀释剂溶解并稀释配制浓度约0.1mg/ml，即得，平行配制两份；

39、（5）进样

40、取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液分别按上述色谱条件进样分析，记录色谱图及数据；

41、（6）计算

42、根据色谱图得到的供试品溶液和对照品溶液的色谱峰面积，按照外标法计算确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量。

43、借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

44、（1）本发明提供的检测方法为目前唯一披露的所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法，使用高效液相色谱法分析效率高，可用于支持该全新药物的研发工作，了解新药的质量和稳定性情况，为新药生产上市提供科学依据；

45、（2）本发明提供的检测方法能实现主成分与溶剂峰的有效分离以及较好的主峰峰型，具有较高的准确性和较强的专属性，为原料药的常规测定提供了一种高效、稳定、可靠的解决方案。

46、上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

1.一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物进样分析，以便获得色谱图，以及基于所述色谱图确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量，其中，所述高效液相色谱法采用以下条件：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱选自ymc-pack pro c18，规格为150mm×4.6mm，3μm，或waters sunfire c18，规格为150mm×4.6mm，3.5μm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱还采用了捕集小柱：ghost -sniper column，50mm×4.6mm。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述进样分析的进样量为10μl。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a中磷酸盐为磷酸氢二钾。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物甲醇溶液，并且基于每毫升供试品溶液，其中2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的浓度约为0.1mg/ml。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，基于所述色谱图确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量，是根据色谱图得到的供试品溶液和对照品溶液的色谱峰面积，按照外标法计算确定所述2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物的含量。

8.一种2,4-二取代-5-氟嘧啶衍生物含量的检测方法，其特征在于，包括：