一种用于激活和上调机体免疫细胞活性的化合物的制作方法

本发明涉及癌症免疫治疗，特别涉及一种用于激活和上调机体免疫细胞活性的化合物、治疗肺癌的组合物及其制备方法与使用方法。

背景技术：

1、免疫疗法是癌症治疗的一种有前途的方法，开创了治疗的新时代。然而，由于实体肿瘤微环境(tumor microenvironment，tme)的免疫抑制性质，免疫疗法作为肺癌患者的单一疗法的疗效仍然有限。为了应对这一挑战，需要能够增强宿主免疫力的替代药物。

2、免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors，icis)程序性细胞死亡蛋白-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白-4(ctla-4)等免疫检查点抑制剂的出现，开创了抗肿瘤治疗的新时代。在过去十年中，icis，尤其是pd-1轴抑制剂，彻底改变了肺癌治疗，成为不可或缺的治疗工具。然而，icis的临床反应率仍然令人失望的低，肺癌患者的平均反应率仅为15％。造成这种有限反应的因素有几个，包括肿瘤负荷、微卫星稳定性、程序性细胞死亡配体-1(pd-l1)的表达和t细胞浸润。对icis治疗的耐药性也带来了重大挑战。

3、此外，肿瘤微环境(tme)的免疫抑制性质对免疫疗法的效力构成了重大挑战。tme是一个复杂的细胞和分子网络，它不仅支持肿瘤的生长和存活，还通过多种机制抑制免疫细胞的功能。例如，tme中的免疫检查点分子、基质细胞和其他因素可以共同作用，限制免疫细胞对肿瘤的攻击，导致免疫逃逸、免疫耐受或免疫逆转现象。

4、为了克服这些障碍，研究人员一直在探索新的药物和治疗策略。一些策略包括使用干扰素基因刺激剂(sting)激动剂、toll样受体(tlr)激动剂，以及细胞免疫疗法，如嵌合抗原受体t细胞(car-t)疗法。这些方法旨在激活或增强免疫系统对肿瘤的响应，但实体肿瘤的复杂性和tme的免疫抑制特性使得这些治疗手段的有效性受限。

5、本发明正是在这一背景下提出的，旨在提供一种新的组合物和治疗方法，通过结合传统中药成分麦冬皂苷-d(op-d)和pd-1抗体，以期增强宿主的抗肿瘤免疫反应，提高肺癌治疗的疗效，特别是对那些对现有免疫疗法反应不佳的患者。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的问题，本发明提供一种用于激活和上调机体免疫细胞活性的化合物、治疗肺癌的组合物及其制备方法与使用方法。

2、其中麦冬皂苷－d(op－d)是从麦冬中提取的一种免疫活性物质。研究表明，特定比例的麦冬与人参共煮可促进骨髓和外周血细胞增殖，提高胸腺指数，减轻化疗引起的骨髓抑制。此外，作为疫苗佐剂，op－d可以增强针对抗原的抗体反应。在抗原刺激下，op－d可以显著增加小鼠脾细胞中th1细胞因子(ifn－γ，il－12p40)，th2细胞因子(il－4)和th17细胞因子(il－17a)的范围。

3、本研究旨在探索op－d作为免疫治疗剂在肺癌治疗中提高抗肿瘤疗效的潜力，并检验其刺激免疫系统的潜在机制。

4、为了实现上述目的，本发明提供一种用于激活和上调机体免疫细胞活性的化合物，其特征在于，该化合物为麦冬皂苷-d，用于诱导免疫细胞活化标志物cd25和cd69的表达；所述麦冬皂苷-d的结构式如下：

5、

6、本发明还提供一种用于治疗肺癌的组合物，所述组合物包括麦冬皂苷－d和pd－1抗体；其中，麦冬皂苷－d作为有效成分，用于激活和上调机体免疫细胞活性；抗pd－1抗体，用于与麦冬皂苷－d协同作用，增强宿主的免疫反应。

7、优选地，所述麦冬皂苷－d是从麦冬属植物的根中提取得到，pd－1抗体是一种特异性结合程序性细胞死亡蛋白－1的单克隆抗体。

8、优选地，所述麦冬皂苷-d在激活t细胞时，激活t细胞和上调免疫细胞活化标志物cd69和cd25的表达，诱导t细胞分泌细胞因子干扰素-γ(ifn-γ)和肿瘤坏死因子α(tnf-α)同时能够刺激白介素-6以及趋化因子cxcl9-11的产生。

9、优选地，所述麦冬皂苷-d通过sting信号通路激活免疫细胞；

10、优选地，所述麦冬皂苷-d能引起钙内流和活化t细胞核因子(nfat)及stat5的核转位。

11、本发明提供一种评估麦冬皂苷-d(op-d)对宿主免疫细胞功能影响的方法，该方法包括如下步骤：

12、步骤s1：将宿主的免疫细胞与麦冬皂苷－d共同培养；

13、步骤s2：测量共同培养后的免疫细胞中cd69和cd25的表达水平；

14、步骤s3：测量麦冬皂苷－d处理后的免疫细胞内钙离子浓度变化，nfat和stat5的核转位情况。

15、本发明提供一种组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

16、步骤a：提取麦冬属植物根中的麦冬皂苷－d；

17、步骤b：生产或采购pd－1抗体；

18、步骤c：将op－d和pd－1抗体按照特定的比例混合形成组合物。

19、本发明还提供一种使用所述的组合物的方法，用于治疗肺癌，该方法包括以下步骤：

20、步骤x1：将op－d(5－10mg/kg)和抗pd－1抗体(10mg/kg)进行组合，形成治疗所需的组合物；

21、步骤x2：通过静脉注射、皮下注射或肌肉注射的方式将组合物施用于患者，以增强其对肿瘤的免疫反应；

22、步骤x3：监测患者的免疫反应和肿瘤生长情况，以评估治疗效果。

23、优选地，所述步骤x1中的op－d和抗pd－1抗体的特定比例是根据患者体内免疫细胞活化标志物cd69和cd25的表达水平确定。

24、在本发明中，已确定麦冬根中提取的免疫活性物质麦冬皂苷－d(op－d)是增强抗原特异性免疫反应并与抗肿瘤免疫疗法产生协同作用的潜在候选药物。体外实验表明，op－d可激活t细胞并上调免疫细胞活化标志物的表达：cd69和cd25，诱导t细胞分泌ifn－γ和tnf－α，此外，op－d还能刺激细胞因子il－6以及趋化因子分子cxcl9－11的产生。体内实验表明，op－d与抗pd－1疗法相结合具有显著的协同作用。这种组合增强了宿主的免疫反应，并创造了抑制肿瘤生长的免疫微环境。总体而言，本发明的研究结果凸显了op－d作为免疫反应增强剂的潜力，以及抗肿瘤免疫疗法的有希望的补充，为肺癌的更好治疗结果铺平了道路。

25、采用本发明的技术方案，具有以下有益效果：

26、本发明能增强免疫反应：组合物中的麦冬皂苷-d(op-d)能够有效激活t细胞，上调免疫细胞活化标志物cd69和cd25的表达，从而增强宿主的免疫反应。

27、本发明能促进细胞因子产生：op-d能够刺激干扰素-γ(ifn-γ)、白介素-6(il-6)以及趋化因子cxcl9-11的产生，这些细胞因子对调节免疫反应至关重要。

28、本发明能激活sting信号通路：op-d通过sting信号通路激活免疫细胞，该通路在细胞对病原体和肿瘤细胞的先天免疫反应中起着核心作用。

29、本发明能促进钙内流和转录因子核转位：op-d诱导的钙内流和nfat及stat5的核转位有助于激活t细胞，增强其对肿瘤细胞的识别和应答。

30、本发明能协同增效：op-d与pd-1抗体联合使用时，op-d显示出协同效应，可能提高免疫检查点抑制剂的疗效，尤其对那些对单独pd-1抗体治疗反应不佳的肺癌患者。

31、本发明的组合物和治疗方法为肺癌患者提供了一种新的治疗选择，尤其是对于那些需要更有效治疗方案的患者。

32、本发明易于制备和施用：组合物的制备方法简单、成本效益高，且施用方法(静脉注射、皮下注射或肌肉注射)为临床应用提供了便利。

33、本发明通过将传统中药成分与现代免疫治疗技术相结合，为癌症免疫治疗领域提供了新的见解和治疗方法；通过结合传统中药成分麦冬皂苷-d(op-d)和pd-1抗体，以期增强宿主的抗肿瘤免疫反应，提高肺癌治疗的疗效，特别是对那些对现有免疫疗法反应不佳的患者。