凋亡素组合肽在制备治疗癫痫的药物中的应用

本发明涉及凋亡素组合肽的新用途，特别涉及凋亡素组合肽在治疗癫痫中的应用。本发明属于医药。

背景技术：

1、癫痫是一种以大脑神经元异常放电为主要特征的神经系统性疾病，通常会引发反复发作的短暂性脑功能障碍，主要表现为肢体抽搐、意识丧失、行为障碍及短暂的感觉障碍等症状，严重危害了患者的生活质量，甚至影响到生命安全。目前的研究认为，神经递质平衡失调、离子通道功能紊乱、自身免疫反应及遗传等因素与癫痫的发生密切相关，但其发病机制十分复杂，迄今为止尚未完全阐明。

2、目前，癫痫的治疗手段主要以药物控制为主，传统抗癫痫药物，如：苯妥英钠、卡马西平、丙戊酸等，具有复杂的药代动力学性质，血药浓度波动范围大，治疗窗窄，治疗效果与毒性反应不易区分，在治疗过程中，患者的癫痫状态往往不易控制；新型抗癫痫药物，如：拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、托吡酯等尽管相对安全有效，但如联用其他酶抑制剂和酶诱导剂均会对其血药浓度产生影响，从而影响疗效并诱发不良反应。因此，亟需开发出一种安全有效的抗癫痫药物，以期控制发作、减少不良反应、改善患者生活质量。

3、凋亡素组合肽(adp)是由44个氨基酸组成的抗肿瘤多肽药物，其氨基酸序列为：

4、“met-gly-arg-lys-lys-arg-arg-gin-arg-arg-arg-leu-lys-pro-pro-ser-lys-lys-arg-lle-arg-lle-gly-lle-ala-gly-lle-thr-lle-thr-leu-ser-leu-arg-pro-arg-thr-ala-lys-arg-arg-lle-arg-leu”，包含凋亡素82-88、111-121位的两个核定位信号，凋亡素33-46位的疏水氨基酸富含区，以及氨基端的转导肽。前期研究证实，凋亡素组合肽通过结合热休克蛋白70(hsp70)基因的热休克元件，抑制hsp70蛋白的应激性表达，只诱导肿瘤细胞凋亡而不引起正常细胞凋亡，有效治疗胶质瘤。但是，凋亡素组合肽对癫痫的治疗仍未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供凋亡素组合肽在制备治疗癫痫的药物中的新用途。

2、为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

3、本发明首先通过在凋亡素组合肽的n端连接cy7进行标记，检测其在体内的药物分布以及是否可透过血脑屏障。结果发现，游离cy7在体内的代谢速度明显快于cy7标记的凋亡素组合肽，尤其是在脑组织中，注射溶液8h后脑组织中已经无法检测到游离cy7的荧光信号，但是仍能检测到cy7标记的凋亡素组合肽的荧光信号，表明凋亡素组合肽可以有效透过血脑屏障，并且在脑组织中长时间存在，发挥其药效。接着本发明通过构建海人酸(ka)小鼠癫痫模型，并分组进行药物注射，在不同时间点提取小鼠海马组织进行western blotting(wb)检测，检测各时间段海马组织中凋亡素组合肽靶蛋白以及ampar亚基表达量的变化，从而验证凋亡素组合肽的治疗效果。结果发现，在构建ka小鼠癫痫模型后，hsp70的表达水平升高，ampar亚基glua2的表达水平下降，并且从急性期一直持续到慢性期，而在注射凋亡素组合肽进行治疗后，则可以显著降低hsp70的表达水平，并提高glua2的表达水平，表明凋亡素组合肽可以通过作用其靶点hsp70从而影响ca2+离子通道受体glua2的表达水平，进而起到治疗癫痫的作用。此外，本发明在构建模型前1周分组进行药物注射，1周后通过多次腹腔戊四唑(ptz)诱导小鼠癫痫发作，通过记录小鼠完全点燃所需注射次数，对比凋亡素组合肽与丙戊酸钠(va)降低小鼠癫痫易感性的能力。结果发现，通过在ptz诱导前一周注射va与凋亡素组合肽均能降低小鼠的癫痫易感性，且凋亡素组合肽效果优于阳性药物va。脑电记录结果显示，通过在ptz诱导前一周注射va与凋亡素组合肽均能降低小鼠的癫痫发作强度，且凋亡素组合肽效果优于阳性药物va。本发明还通过提取sd大鼠神经原代细胞并进行培养，在神经原代细胞成熟后利用ka诱导细胞癫痫模型，同时加入凋亡素组合肽进行干预，24h后通过fluo-4钙离子检测法检测神经原代细胞内钙离子浓度，验证凋亡素组合肽对细胞内钙离子水平的影响。fluo-4钙离子检测结果显示，使用ka诱导细胞癫痫模型24h后细胞内钙离子浓度显著升高，若加入凋亡素组合肽进行治疗，则可以逆转ka诱导导致的钙离子浓度升高，说明凋亡素组合肽可以显著抑制癫痫导致的细胞内钙离子浓度升高。通过构建ka小鼠癫痫模型，并分组进行药物注射，1个月后通过barnes迷宫检测小鼠学习记忆功能变化，从而验证凋亡素组合肽的治疗效果。barnes迷宫结果显示，使用凋亡素组合肽治疗30d后，小鼠找到目标洞的所需时间显著缩短，错误次数显著减少，且小鼠行动的总路程无显著差异，说明凋亡素组合肽可以显著改善癫痫小鼠的空间学习和记忆能力，并且对小鼠的行动能力无明显干扰。

4、因此，在上述研究的基础上，本发明提出了凋亡素组合肽在制备治疗癫痫的药物中的应用，所述的凋亡素组合肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。

5、其中，优选的、所述的凋亡素组合肽能够显著抑制癫痫导致的细胞内钙离子浓度升高，提高glua2的表达水平，从而降低癫痫发作强度以及易感性，显著改善患者的空间学习和记忆能力，并且对患者的行动能力无明显干扰。

6、其中，优选的，所述的药物为注射药物。

7、相较于现有技术，本发明的有益效果是：

8、本发明提供了凋亡素组合肽在制备治疗癫痫的药物中的新用途。使用凋亡素组合肽治疗癫痫，药代动力学性质良好，可以透过血脑屏障，有效到达病变靶点；同时，有效地减少了癫痫发作强度和癫痫易感性，极大地改善了癫痫患者的认知功能障碍。

1.凋亡素组合肽在制备治疗癫痫的药物中的应用，所述的凋亡素组合肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的凋亡素组合肽能够显著抑制癫痫导致的细胞内钙离子浓度升高，提高glua2的表达水平，从而降低癫痫发作强度以及易感性，显著改善患者的空间学习和记忆能力，并且对患者的行动能力无明显干扰。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为注射药物。