靶向敲除HLA-G异构体基因的基因编辑系统和应用的制作方法
技术特征：
1.敲除hla-g异构体基因的sgrna组合，其特征在于，包括分别针对hla-g异构体基因的基因结构设计的靶标序列和互补序列；
2.根据权利要求1所述sgrna组合，其特征在于，所述靶标序列和互补序列的核苷酸序列依次如seq id no.1～seq id no.14所示。
3.靶向敲除hla-g异构体基因的crispr/cas9载体组合，其特征在于，包括由权利要求1或2所述sgrna组合中针对各基因结构设计的靶标序列和互补序列退火后形成的双链序列与基因编辑载体连接构建得到的crispr/cas9载体。
4.根据权利要求3所述crispr/cas9载体组合，其特征在于，所述基因编辑载体包括plenticrisprv2基因重组质粒。
5.一种敲除hla-g异构体基因的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述sgrna组合，或权利要求3或4所述crispr/cas9载体组合。
6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，利用所述试剂盒敲除整个hla-g基因时，所述crispr/cas9载体组合包括：plenticrisprv2-e1、plenticrisprv2-e2、plenticrisprv2-e3、plenticrisprv2-e4、plenticrisprv2-e5、plenticrisprv2-i2和plenticrisprv2-i4；
7.根据权利要求5或6所述试剂盒，其特征在于，利用所述试剂盒敲除膜结合型hla-g1基因的载体组合包括：plenticrisprv2-e1、plenticrisprv2-e2、plenticrisprv2-e3、plenticrisprv2-e4和plenticrisprv2-e5；
8.根据权利要求5或6所述试剂盒，其特征在于，利用所述试剂盒敲除缺失α1的hla-g基因的载体组合包括:plenticrisprv2-e3、plenticrisprv2-e4和plenticrisprv2-e5；
9.靶向敲除hla-g异构体基因的crispr/cas9慢病毒试剂盒，其特征在于，包括靶向敲除不同hla-g异构体基因的crispr/cas9慢病毒系统；
10.权利要求1或2所述sgrna组合、权利要求3或4所述crispr/cas9载体组合、权利要求5～8任一项所述试剂盒或权利要求9所述crispr/cas9慢病毒试剂盒在制备以hla-g为治疗靶点的药物中的应用。
技术总结
本发明提供了靶向敲除HLA‑G异构体基因的基因编辑系统和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了靶向HLA‑G基因的外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、内含子2和内含子4的sgRNA，分别包括一条靶向序列和一条互补序列。本发明将上述sgRNA经退火后形成双链片段，将所述双链片段插入到基因编辑载体中，构建得到针对整体HLA‑G基因、膜结合型HLA‑G1～‑G4基因、可溶性HLA‑G5～‑G7基因以及新型HLA‑G基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体组合。本发明利用慢病毒对所述CRISPR/Cas9基因编辑载体组合分别进行包装，可实现精准敲除不同的HLA‑G异构体基因或者完整性敲除HLA‑G基因，包括新型异构体。
技术研发人员：许惠惠,闫子怡,袁浩博,李蓉
受保护的技术使用者：台州恩泽医疗中心（集团）
技术研发日：
技术公布日：2024/12/19
技术研发人员：许惠惠,闫子怡,袁浩博,李蓉
技术所有人：台州恩泽医疗中心（集团）
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