一种极速型环氧乙烷生物指示剂及其制备方法与流程

本发明涉及医疗器械低温消毒，更具体地说，是涉及一种极速型环氧乙烷生物指示剂及其制备方法。

背景技术：

1、医疗器械的无菌保证是患者生命健康的最基本要求，灭菌生物监测结果是评判医疗器械灭菌是否合格最可靠的指标。环氧乙烷可以杀灭各种微生物，包括细菌繁殖体、芽孢、病毒和真菌孢子，是一种广谱灭菌剂。一般认为是由于它能与微生物的蛋白质、dna和rna发生非特异性烷基化作用，更重要的是，环氧乙烷的杀菌作用是不可逆的。美国药典第17版首先记载了用芽孢作为环氧乙烷和热力灭菌的生物监测指标，并出现了生物指示剂（biological indicator）这一学术专用名词。在21版中全面规范了多种灭菌因子的生物指示剂，其中就包括了用于环氧乙烷灭菌效果监测的枯草杆菌黑色变种芽孢atcc9372株，我国原卫生部2017年版《消毒技术规范》中也做了明确规定。

2、生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能，灭菌程序的验证，生产过程灭菌效果的监控等。环氧乙烷可用于不耐高温、不耐湿热物品的灭菌，具有广谱灭菌和穿透性强的优点，而且由于其杀灭微生物是利用烷基化原理而非氧化过程，因此对物品损坏非常小，对不耐热精密仪器灭菌由着非常广泛的用途，可以说环氧乙烷过去、今后和将来仍将是一种主要的低温灭菌方式。

3、目前，用于环氧乙烷灭菌效果检测的生物指示剂的培养时间一般为3小时左右或48小时，如专利cn202223465093.4公开了一种环氧乙烷灭菌生物挑战包，通过一种塑料壳与密封膜结合形成的长孔道结构的生物挑战包，对现有环氧乙烷灭菌生物指示剂传统打包方式进行替换，使其操作更加简便，节省时间；但生物挑战包内包含的生物指示剂所需培养时间是3小时，无法进一步缩短这个时间。由此可知，现有技术还没一种环氧乙烷生物指示物可以将培养时间缩短到1小时，更长的培养时间会降低医疗器械的周转效率，提高医院的用料成本，甚至耽误急救患者的抢救时间。同时，由于传统配方中，碳源和氮源的来源比较单一，会被不同的环境影响，单纯的增加或减少碳源氮源的量会使培养基的稳定性降低，甚至出现返色（假阴性）现象，影响医院结果判读，影响灭菌物品正常使用，造成经济损失。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种极速型环氧乙烷生物指示剂及其制备方法，本发明提供的极速型环氧乙烷生物指示剂，能够极大缩短灭菌物品的放行时间，提高灭菌物品周转效率，为更多患者争取治疗时间。

2、本发明提供了一种极速型环氧乙烷生物指示剂，包括生物指示物芽孢和恢复培养基，所述恢复培养基包括：

3、复合碳源20~25g/l，复合萌发剂2~3g/l，复合氮源8~12g/l，缓冲体系1.5~2.5g/l，变色指示物1~2ml/l，底物0.5~1g/l，溶剂为水；

4、所述复合碳源由葡萄糖、淀粉、抗坏血酸和棉籽油组成；所述复合氮源包括有机氮源和无机氮源。

5、优选的，所述生物指示物芽孢为枯草芽孢杆菌黑色变种atcc9372芽孢。

6、优选的，所述复合碳源中葡萄糖、淀粉、抗坏血酸和棉籽油的质量比为1：0.5：0.4：0.3。

7、优选的，所述复合萌发剂由l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸钙组成。

8、优选的，所述复合萌发剂中l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸钙的质量比为3：1：1。

9、优选的，所述复合氮源由酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸铵组成。

10、优选的，所述复合氮源中酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸铵的质量比为1.5：2.5：1。

11、优选的，所述缓冲体系由磷酸二氢钾和磷酸氢二钠组成，使恢复培养基的ph值为7.4

12、所述变色指示物为2%溴百里酚蓝溶液；

13、所述底物为4-mug。

14、优选的，所述恢复培养基的配方具体为：

15、葡萄糖10g/l，淀粉5g/l，抗坏血酸4g/l，棉籽油3g/l，l-天冬酰胺1.5g/l，l-半胱氨酸0.5g/l，2,6-吡啶二羧酸钙0.5g/l，酵母提取物3g/l，大豆蛋白胨5g/l，硫酸铵2g/l，磷酸二氢钾0.2245g/l，磷酸氢二钠1.9734g/l，2%溴百里酚蓝溶液1.6ml/l，底物4-mug0.8735g/l，溶剂为水。

16、本发明还提供了一种上述技术方案所述的极速型环氧乙烷生物指示剂的制备方法，包括以下步骤：

17、将水升温到70℃~80℃，在搅拌条件下，加入淀粉，溶解后降至20℃~30℃；再加入葡萄糖、抗坏血酸、棉籽油、复合萌发剂、复合氮源和底物继续搅拌；然后加入缓冲体系和变色指示物进行超声处理，得到恢复培养基；

18、将上述恢复培养基熔封在安瓿瓶中，与生物指示物芽孢组合，得到极速型环氧乙烷生物指示剂。

19、本发明提供了一种极速型环氧乙烷生物指示剂，包括生物指示物芽孢和恢复培养基，所述恢复培养基包括：复合碳源20~25g/l，复合萌发剂2~3g/l，复合氮源8~12g/l，缓冲体系1.5~2.5g/l，变色指示物1~2ml/l，底物0.5~1g/l，溶剂为水；所述复合碳源由葡萄糖、淀粉、抗坏血酸和棉籽油组成；所述复合氮源包括有机氮源和无机氮源。与现有技术相比，本发明提供的极速型环氧乙烷生物指示剂，采用特定含量的特定组分限定的恢复培养基，实现整体较好的相互作用，通过上述环氧乙烷生物指示物的特定恢复培养基配方，能够在不改变其d值（在规定的条件下，灭活试验微生物总数的90%所需的时间或剂量）和活菌量（实际可回收的菌落形成单位或其他合适单位的数量）的前提下使芽孢快速萌发，缩短培养时间至1小时，从而极大缩短灭菌物品的放行时间，提高灭菌物品周转效率，为更多患者争取治疗时间。

20、此外，本发明提供的制备方法原材料易得、成本低、易于存储，且整体工艺步骤简单，条件温和、易控，具有广阔的应用前景。

1.一种极速型环氧乙烷生物指示剂，包括生物指示物芽孢和恢复培养基，其特征在于，所述恢复培养基包括：

2.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述生物指示物芽孢为枯草芽孢杆菌黑色变种atcc9372芽孢。

3.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述复合碳源中葡萄糖、淀粉、抗坏血酸和棉籽油的质量比为1：0.5：0.4：0.3。

4.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述复合萌发剂由l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸钙组成。

5.根据权利要求4所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述复合萌发剂中l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸钙的质量比为3：1：1。

6.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述复合氮源由酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸铵组成。

7.根据权利要求6所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述复合氮源中酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸铵的质量比为1.5：2.5：1。

8.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述缓冲体系由磷酸二氢钾和磷酸氢二钠组成，使恢复培养基的ph值为7.4

9.根据权利要求1所述的极速型环氧乙烷生物指示剂，其特征在于，所述恢复培养基的配方具体为：

10.一种权利要求1~9任一项所述的极速型环氧乙烷生物指示剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：