基于XRCC3与XPC基因分析卵巢癌早期筛查方法与流程

1.基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤三中，所述mrna的逆转录反应采用cbcscript逆转录酶，以保证逆转录效率和cdna的完整性，通过将从实验组-临床卵巢癌患者和对照组-其他良性疾病就诊患者收集的mrna混合，并根据cbcscript逆转录酶的用户手册中提供的反应条件设置，包括适宜的温度和时间，在反应完成后，利用琼脂糖凝胶电泳法确认cdna的质量，通过比较cdna的条带大小与标准标记，以验证完整性。

3.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤四中，加入全基因组扩增试剂的浓度范围为1-5μl，并保持反应体系的体积在20-50μl，在扩增过程中采用热循环程序，包括以下阶段：

4.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤五中，片段化后的dna样本需经过酶解处理，其酶的选择包括限制性内切酶或dna片段化酶，生成的dna片段在200-500bp范围内，在dna沉淀后，通过离心和洗涤去除未结合的试剂和酶，得到高纯度的片段化dna样本，并重悬于适当的杂交缓冲液中。

5.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤六中，片段化后的dna样本经过变性处理，使其转变为单链形式，此时，dna样本中的序列与芯片上位点特异的50个碱基探针进行退火结合，每个微珠bead上连接着不同的50个碱基序列。

6.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤七中，将芯片放入xc4试剂中进行包被，使芯片的表面包裹上一层粘性透明液体，在芯片外形成保护层。

7.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤八中，将经过杂交和延伸反应处理的芯片放入扫描仪中，通过激光激发芯片上单碱基延伸产物的荧光基团，扫描仪获取由荧光基团发出的荧光信号，并生成高分辨率的图像数据，所得的图像数据直接导入luxscan3.0图像分析软件处理与分析，提取每个样本的snp分型数据。

8.根据权利要求1所述的基于xrcc3与xpc基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，所述步骤九中，根据目标基因的序列信息设计特异性引物，引物的tm值相近，在在rt-pcr反应中，设定初始变性温度为95℃，退火温度为60℃，延伸温度为72℃，每个循环设定为30秒，pcr产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，确认扩增的特异性和大小，通过比较扩增产物的条带强度及位置，确认上调和下调基因的表达差异。