一种细胞外囊泡长链RNA文库构建方法

1.一种细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其包括：

2.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述细胞外囊泡rna为从细胞外囊泡中提取的rna；较佳地，所述细胞外囊泡来源于细胞、组织及体液；更佳地，所述细胞外囊泡来源于细胞上清液、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、鼻分泌液、肺泡冲洗液、乳汁、滑液、精液、宫腔液、胆汁、淋巴液、粪便、脂肪组织、脑组织、羊水、胚胎培养液。

3.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤i)还包括：去除细胞外囊泡rna中的dna；

4.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤i)中，所述rna片段化包括：通过化学法和/或酶消化法进行rna打断处理；较佳地，rna片段化后，rna片段大小为80～300nt；更佳地，rna在含镁离子的反转录缓冲液中片段化。

5.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤ii)包括：使用随机引物反转录并添加3’接头序列，以及模板转换并添加5’接头序列；

6.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤iv)中，所述sgrna包括选自如seq id no：30～108所示核苷酸序列的sgrna。

7.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤iii)和所述步骤v)中所述的纯化方法为利用磁珠进行纯化；较佳地，利用磁珠纯化后获得的cdna片段大小为200-500bp。

8.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述步骤iii)和所述步骤v)中所述的扩增为pcr扩增；较佳地，所述步骤iii)中pcr扩增为低循环数(优选5～7个循环)的pcr扩增，所述步骤v)中pcr扩增为高循环数(优选7～10个循环)的pcr扩增。

9.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，步骤iii)中，进行第一次扩增时，以seq id no:5和6、或seq id no:7和8所示的引物进行扩增，和/或，步骤v)中，进行第二次扩增时，以seq id no:7和8、或seq id no:27和28所示的引物进行扩增。

10.如权利要求1所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：对获得的细胞外囊泡长链rna文库进行质检，和/或测序；

11.一种细胞外囊泡长链rna文库，其通过如权利要求1～10任一项所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法制备获得。

12.权利要求1～10任一项所述的细胞外囊泡长链rna文库的制备方法的应用，包括用于：

13.一种从细胞外囊泡rna的cdna产物中去除核糖体rna的方法，其包括：利用靶向核糖体rna的sgrna、通过crispr/cas方法去除核糖体rna；较佳地，所述sgrna包括选自如seq idno：30～108所示核苷酸序列的sgrna。