一种多重PCR结合CRISPR-Cas快速检测呼吸道病原体的试剂盒的制作方法

1.一种多重pcr结合crispr-cas快速检测呼吸道病原体的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括多重扩增引物组合、装填sgrna的sgrna检测板、dna聚合酶、rna逆转录酶、crispr/cas蛋白、荧光报告探针；

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于呼吸道病原体为以下178种呼吸道病原体中的一种或多种：

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述crispr/cas蛋白为cas12a蛋白。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述呼吸道病原体和对应的检测该病原体靶标序列的sgrna如下表所示：

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的荧光报告探针为一段单链dna，其5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括多重扩增体系和检测体系，所述多重扩增体系包括多重扩增引物组合、扩增酶、扩增缓冲液；所述扩增酶包括dna聚合酶、rna逆转录酶；

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括内标和阴性对照；

8.利用权利要求1～7之一任一项所述的多重pcr结合crispr-cas快速检测呼吸道病原体的试剂盒，高通量检测呼吸道病原体的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于所述步骤(3)的反应条件为：避光条件下，37～42℃反应20～30min。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，检测板的每个检测孔分别装填seq no 383～569所示序列，其中鸟分枝杆菌复合群扩增2个靶标序列，与其互补的两条sgrna，序列如seq id no.415、seq id no.416所示，装填于同一检测孔中；