血清替代物、培养基及其在肿瘤类器官培养中的应用的制作方法

1.一种血清替代物，其特征在于，包括：胆固醇、l-抗坏血酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、（±）-α-硫辛酸、超氧化物歧化酶、亚硒酸钠、过氧化氢酶、l-肉碱盐酸盐、腐胺二盐酸盐、l-还原性谷胱甘肽、d-（+）-半乳糖、转铁蛋白、亚麻酸、视黄醇乙酸酯、（±）-α-生育酚乙酸酯、皮质酮、dl-α-生育酚、三碘代甲状腺素钠盐、胰岛素和牛血清白蛋白。

2.根据权利要求1所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物中所包含的胆固醇、l-抗坏血酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、（±）-α-硫辛酸、超氧化物歧化酶、亚硒酸钠、过氧化氢酶、l-肉碱盐酸盐、腐胺二盐酸盐、l-还原性谷胱甘肽、d-（+）-半乳糖、转铁蛋白、亚麻酸、视黄醇乙酸酯、（±）-α-生育酚乙酸酯、皮质酮、dl-α-生育酚、三碘代甲状腺素钠盐、胰岛素和牛血清白蛋白的浓度比为（20-500）：（25-1000）：（10-100）：（10-500）：（0.1-20）：（10-500）：（0.1-10）：（25-1000）：（40-800）：（500-10000）：（10-500）：（200-10000）：（300-8000）：（10-500）：（0.1-50）：（10-500）：（0.1-10）：（10-500）：（0.01-1）：（50-5000）：（10-500）。

3.根据权利要求1所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物包括：20mg/l-500mg/l 胆固醇、25mg/l-1000 mg/l l-抗坏血酸、10mg/l-100mg/l 花生四烯酸、10mg/l-500mg/l肉豆蔻酸、0.1mg/l-20mg/l （±）-α-硫辛酸、10mg/l-500mg/l超氧化物歧化酶、0.1mg/l-10mg/l亚硒酸钠、25mg/l-1000mg/l过氧化氢酶、40mg/l-800mg/l l-肉碱盐酸盐、500mg/l-10000mg/l腐胺二盐酸盐、10mg/l-500mg/l l-还原性谷胱甘肽、200mg/l-10000mg/l d-（+）-半乳糖、300mg/l-8000mg/l 转铁蛋白、10mg/l-500mg/l 亚麻酸、0.1mg/l-50mg/l视黄醇乙酸酯、10mg/l-500mg/l（±）-α-生育酚乙酸酯、0.1mg/l-10mg/l 皮质酮、10mg/l-500mg/l dl-α-生育酚、0.01mg/l-1mg/l 三碘代甲状腺素钠盐、50mg/l-5000mg/l胰岛素和10g/l-500g/l 牛血清白蛋白。

4.根据权利要求3所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物包括：50mg/l-200mg/l 胆固醇、50mg/l-500 mg/l l-抗坏血酸、20mg/l-60mg/l 花生四烯酸、30mg/l-300mg/l肉豆蔻酸、1mg/l-10mg/l （±）-α-硫辛酸、20mg/l-150mg/l超氧化物歧化酶、0.5mg/l-5mg/l亚硒酸钠、50mg/l-500mg/l过氧化氢酶、100mg/l-500mg/l l-肉碱盐酸盐、1000mg/l-5000mg/l腐胺二盐酸盐、20mg/l-200mg/l l-还原性谷胱甘肽、500mg/l-5000mg/l d-（+）-半乳糖、500mg/l-3000mg/l 转铁蛋白、30mg/l-300mg/l 亚麻酸、1mg/l-30mg/l视黄醇乙酸酯、20mg/l-200mg/l（±）-α-生育酚乙酸酯、0.5mg/l-5mg/l 皮质酮、50mg/l-200mg/l dl-α-生育酚、0.05mg/l-0.5mg/l 三碘代甲状腺素钠盐、200mg/l-2000mg/l 胰岛素和50g/l-300g/l 牛血清白蛋白。

5.根据权利要求4所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物包括：60mg/l 胆固醇、80 mg/l l-抗坏血酸、30mg/l 花生四烯酸、80mg/l肉豆蔻酸、8mg/l （±）-α-硫辛酸、20mg/l 超氧化物歧化酶、4mg/l亚硒酸钠、300mg/l过氧化氢酶、300mg/l l-肉碱盐酸盐、3000mg/l腐胺二盐酸盐、150mg/l l-还原性谷胱甘肽、2000mg/l d-（+）-半乳糖、2500mg/l转铁蛋白、40mg/l 亚麻酸、25mg/l视黄醇乙酸酯、30mg/l（±）-α-生育酚乙酸酯、3mg/l 皮质酮、60mg/l dl-α-生育酚、0.06mg/l 三碘代甲状腺素钠盐、300mg/l 胰岛素和80g/l 牛血清白蛋白。

6.根据权利要求4所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物包括：150mg/l 胆固醇、50 mg/l l-抗坏血酸、30mg/l 花生四烯酸、200mg/l肉豆蔻酸、8mg/l （±）-α-硫辛酸、100mg/l 超氧化物歧化酶、4mg/l亚硒酸钠、300mg/l过氧化氢酶、200mg/l l-肉碱盐酸盐、1000mg/l腐胺二盐酸盐、150mg/l l-还原性谷胱甘肽、3000mg/l d-（+）-半乳糖、2500mg/l 转铁蛋白、40mg/l 亚麻酸、30mg/l视黄醇乙酸酯、40mg/l（±）-α-生育酚乙酸酯、4mg/l 皮质酮、60mg/l dl-α-生育酚、0.06mg/l 三碘代甲状腺素钠盐、1000mg/l 胰岛素和50g/l 牛血清白蛋白。

7.根据权利要求4所述的血清替代物，其特征在于，所述血清替代物包括：150mg/l 胆固醇、80 mg/l l-抗坏血酸、30mg/l 花生四烯酸、200mg/l肉豆蔻酸、8mg/l （±）-α-硫辛酸、20mg/l 超氧化物歧化酶、4mg/l亚硒酸钠、300mg/l过氧化氢酶、300mg/l l-肉碱盐酸盐、1000mg/l腐胺二盐酸盐、150mg/l l-还原性谷胱甘肽、3000mg/l d-（+）-半乳糖、2500mg/l 转铁蛋白、40mg/l 亚麻酸、25mg/l视黄醇乙酸酯、100mg/l（±）-α-生育酚乙酸酯、4mg/l 皮质酮、60mg/l dl-α-生育酚、0.07mg/l 三碘代甲状腺素钠盐、300mg/l 胰岛素和80g/l 牛血清白蛋白。

8.一种培养基，其特征在于，包括：权利要求1-7任一项所述的血清替代物。

9.根据权利要求8所述的培养基，其特征在于，进一步包括：辅助因子和基础培养基中的至少之一。

10.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述辅助因子包括：igf1、gremlin 1、egf、r-spondinl、a8301、y-27632、sb202190、n2、pge2、hepes、glutamax、青霉素、链霉素和dmem/f12培养液。

11.根据权利要求10所述的培养基，其特征在于，所述辅助因子包括：100ng/ml igf1、200ng/ml gremlin 1、50ng/ml egf、1μg/ml r-spondinl、500nm a8301、10μm y-27632、10μm sb202190、1× n2、0.5μm pge2、10mm hepes、2mm glutamax、500u/ml 青霉素和500u/ml链霉素。

12.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述辅助因子包括：bmp2，gremlin1，igf2，ltbp2，egf，hgf，y27632，n2，hepes，glutamax，青霉素，链霉素，dmem/f12培养液。

13.根据权利要求12所述的培养基，其特征在于，所述辅助因子包括：50ng/ml bmp2，50ng/ml gremlin1，50ng/ml igf2，100ng/ml ltbp2，100ng/ml egf，50ng/ml hgf，5μmy27632，1x n2，10mmhepes，2mmglutamax，500u/ml青霉素，500u/ml链霉素，dmem/f12培养液。

14.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基选自advanced dmem/f12。

15.权利要求8-14任一项所述培养基在制备试剂盒的用途，所述试剂盒用于培养肿瘤类器官。

16.一种肿瘤类器官的构建方法，其特征在于，包括：利用权利要求8-14任一项所述的培养基对肿瘤细胞进行培养的步骤。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞包括结直肠癌和人头颈鳞癌细胞的至少之一。

18.一种肿瘤类器官，其特征在于，所述肿瘤类器官采用权利要求16或17所述方法构建。