基于超高密度冻存的CHO细胞接种的灌流工艺细胞培养方法与流程
技术特征：
1.一种培养cho细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述培养cho细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，cho细胞在反应体系中接种的初始细胞密度为不低于8.0×106个/ml，使用的培养基包括种子培养基，优选为cd-cho培养基，更优选为加压cd-cho培养基。
3.根据权利要求2所述培养cho细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)的种子扩增培养的具体操作包括：将解冻的cho细胞种子直接接种至含有种子培养基的生物反应器罐体中，以1.0～2.5vvd的灌流速率进行扩增培养，将培养温度控制在36.0～37.0℃，溶氧范围控制在20％～80％，ph值控制在6.65～7.35，搅拌转速为220～400rpm。
4.根据权利要求1～3任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，当种子扩增培养至细胞密度不低于40.0×106个/ml时，切换罐流培养基进行灌流培养；优选地，所述灌流培养基为73434培养基。
5.根据权利要求1～4任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，所述步骤(3)的灌流培养的具体操作包括：将灌流培养基按1.0～2.5vvd的灌流速率进行灌流，将温度控制在36.0～37.0℃，溶氧范围控制在20％～80％，ph值控制在6.65～7.35，搅拌转速为220～400rpm。
6.根据权利要求1～5任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，当将步骤(3)中的细胞从种子扩增培养起6天内培养至细胞密度大于40.0×106个/ml时，降温至32～34℃。
7.根据权利要求1～6任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，在所述步骤(3)的灌流培养的过程中，控制反应体系中葡萄糖的浓度不低于2.00g/l，当反应体系中葡萄糖浓度低于2.00g/l时流加葡萄糖，以维持反应体系中葡萄糖浓度不低于2.00g/l，当葡萄糖浓度高于3.00g/l时，逐渐减少葡萄糖的流加量至流加停止；
8.根据权利要求1～7任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，所述cho细胞为包含编码外源蛋白的cho细胞；优选地，所述cho细胞为cho-k1、cho-s、cho-k1sv、cho-gs或cho-dg44，所述外源蛋白为抗体；更优选地，所述外源蛋白为单克隆抗体或双特异性抗体。
9.根据权利要求1～8任一项所述培养cho细胞的方法，其特征在于，所述冻存的超高密度cho细胞种子的制备方法包括：
技术总结
本发明提供了基于超高密度冻存的CHO细胞接种的灌流工艺细胞培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明所提供的灌流工艺细胞培养方法，直接对高密度冻存的CHO细胞解冻后进行N‑1罐扩种培养及N罐灌流培养。本发明的这种培养方法，可减少细胞传代次数，使得生产细胞更加稳健，大大缩短细胞培养时间、提高生产效率；反应器中的高密度和较大提及细胞降低了污染风险；可获得与传统培养工艺培养组产量及质量可比的蛋白产物，因而具有广阔的应用前景。
技术研发人员：李小娟,李涵,赵希章
受保护的技术使用者：信达生物制药（苏州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/28
技术研发人员：李小娟,李涵,赵希章
技术所有人：信达生物制药（苏州）有限公司
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