一株发酵乳杆菌HN-8及其在制备降血糖血脂发酵椰浆饮料中的应用

本发明涉及微生物，具体涉及一株发酵乳杆菌hn-8及其在制备降血糖血脂发酵椰浆饮料中的应用。

背景技术：

1、糖尿病作为一种常见的代谢性疾病，其特征表现为慢性高血糖，且发病机制与患者机体胰岛素抵抗相关。而胰岛素有助于患者机体合成大量的三酰甘油和极低密度脂蛋白，在肝脏内不断聚积，造成脂代谢紊乱，形成高血脂；高血脂已成为冠心病、心肌梗塞、动脉粥样硬化等疾病的潜在因素。糖尿病和高血脂作为现代社会中常见的慢性病，长期进行化学药物治疗将会影响患者的肝脏肾脏功能，并且产生药物耐药等问题。

2、椰子属于单子叶棕榈科植物，其经济价值极高，在许多热带和亚热带地区得到了广泛种植。乳白色的椰肉经加工后与壳体分离，按生产需求制成椰子片、椰蓉、椰子油等产品。椰浆是选用新鲜成熟的椰子，经过削皮去壳、压榨、过滤、均质等多道程序制作而成。椰浆被马来西亚和印尼的人们称为参丹，可见其营养价值极高。椰浆中富含脂肪和蛋白质，其中46%脂肪是月桂酸，它是中链甘油三酯的主要来源，具有降胆固醇、抑菌、增强免疫力等生理活性。椰子蛋白种含有人体所需的18种氨基酸，8种必需氨基酸种类齐全,并且在降血脂、降低胆固醇、抑制高血脂症等方面有一定的治疗效果。

3、发酵乳杆菌属于乳杆菌属的革兰氏阳性细菌，是一种益生菌，在自然界中广泛存在于发酵食品、动植物的肠道、土壤等环境中。发酵乳杆菌被认为可以维护肠道微生态平衡，促进消化吸收，提高免疫力。在乳制品发酵中能够进行乳糖发酵，产生乳酸，在医学、食品保健领域有着广泛的应用。

4、因而，筛选一株新的发酵乳杆菌用来发酵椰浆以提高椰子的经济价值，并且开发出一种绿色的降糖脂食品具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一株发酵乳杆菌hn-8。

2、本发明还要解决的技术问题是提供上述发酵乳杆菌在制备降血糖血脂发酵椰浆饮料中的应用。

3、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

4、一株发酵乳杆菌，分类命名为发酵乳杆菌 hn-8 limosilactobacillus fermentum hn-8，菌株号为hn-8，已于2024年9月5日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称：cctcc），保藏编号为cctcc no：m 20241917，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。

5、其中，所述发酵乳杆菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

6、seq id no.1：

7、atactgcaagtcgaacgcgttggcccaattgattgatggtgcttgcacctgattgattttggtcgccaacgagtggcggacgggtgagtaacacgtaggtaacctgcccagaagcgggggacaacatttggaaacagatgctaataccgcataacaacgttgttcgcatgaacaacgcttaaaagatggcttctcgctatcacttctggatggacctgcggtgcattagcttgttggtggggtaacggcctaccaaggcgatgatgcatagccgagttgagagactgatcggccacaatgggactgagacacggcccatactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatgggcgcaagcctgatggagcaacaccgcgtgagtgaagaagggtttcggctcgtaaagctctgttgttaaagaagaacacgtatgagagtaactgttcatacgttgacggtatttaaccagaaagtcacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagagagtgcaggcggttttctaagtctgatgtgaaagccttcggcttaaccggagaagtgcatcggaaactggataacttgagtgcagaagagggtagtggaactccatgtgtagcggtggaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggctacctggtctgcaactgacgctgagactcgaaagcatgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgagtgctaggtgttggagggtttccgcccttcagtgccggagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagctacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcttgcgccaaccctagagatagggcgtttccttcgggaacgcaatgacaggtggtgcatggtcgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgttactagttgccagcattaagttgggcactctagtgagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggacgacgtcagatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaacgagtcgcgaactcgcgagggcaagcaaatctcttaaaaccgttctcagttcggactgcaggctgcaactcgcctgcacgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgagagtttgtaacacccaaagtcggtggggtaaccttttaggagccagccgcctaa。

8、其中，所述的发酵乳杆菌的形态、生理学鉴定结果如下：

9、发酵乳杆菌hn-8是一类革兰氏阳性细菌，在显微镜下细胞形态呈杆状。将其在mrs固体培养基上培养，结果如图1所示，从图中可以观察到，发酵乳杆菌hn-8的菌落为中等大小，凸起，湿润，边缘整齐，呈白色圆形。

10、进一步的，通过对发酵乳杆菌hn-8菌株的表面疏水性、自聚能力、耐酸能力、耐胆盐能力进行测定，发现发酵乳杆菌hn-8菌株的疏水性为1.78±0.18%；具有很强的自聚能力；在ph 3.0~5.0的范围内，菌株具有一定的耐酸能力，在发酵过程中能够保持良好的活性；在胆盐浓度为0~0.5%的范围内，发酵乳杆菌hn-8具有良好的胆盐耐受性。

11、进一步的，通过对发酵乳杆菌hn-8在人工胃液和肠液中耐受能力进行测定，发现发酵乳杆菌hn-8具有较高的人工肠液耐受性，且能够在胃肠道中存在一定的抗逆性，从而发挥其益生功能。

12、进一步的，通过对发酵乳杆菌hn-8的淀粉酶抑制率、胰脂肪酶抑制率进行测定，发现发酵乳杆菌hn-8的菌液浓度对淀粉酶活性和胰脂肪酶活性的抑制作用成正相关。

13、一种食品发酵剂，它包含了所述的发酵乳杆菌也在本发明所保护的范围之内。

14、所述的发酵乳杆菌在制备发酵椰浆饮料中的应用也在本发明所保护的范围之内。

15、一种利用所述发酵乳杆菌制备发酵椰浆饮料的方法，将活化后的发酵乳杆菌接种至灭菌后的椰浆中静置发酵、再经低温后熟，获得发酵椰浆饮料。

16、其中，所述活化，具体是将发酵乳杆菌接种于mrs液体培养基中，37 ℃培养24 h后，将发酵液涂布于mrs固体培养基中，在37 ℃下培养48 h，挑取单个菌落，再次接种于mrs液体培养基中，在37℃下活化18 h得到的。

17、具体的，所述mrs固体培养基配方如下：葡萄糖20.0 g，蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0g，酵母浸粉5.0 g，柠檬酸三铵2.0 g，磷酸氢二钾2.62 g，无水乙酸钠5.0 g，硫酸镁0.58g，硫酸铵0.198 g，吐温80 1.0 ml，琼脂15.0 g，加1000 ml蒸馏水，充分溶解后ph调至6.0，分装后121℃高压灭菌20 min。

18、其中，所述接种，其接种量为2~5% v/v；所述发酵乳杆菌接种至灭菌后的椰浆中时，发酵乳杆菌的菌液浓度为106~109 cfu/ml。

19、优选的，所述接种，其接种量为3% v/v；所述发酵乳杆菌接种至灭菌后的椰浆中时，发酵乳杆菌的菌液浓度为108 cfu/ml。

20、其中，所述椰浆是将椰肉与无菌水混合匀浆后，经过滤、杀菌得到的；其中，所述椰肉与无菌水的料液比为1：2~4，优选为1：2。

21、具体的，所述椰浆为老椰浆。

22、具体的，所述杀菌采用巴氏杀菌，所述巴氏杀菌的条件为：杀菌温度65 ℃，杀菌时间30 min。

23、在本发明的一些实施例中，所述椰肉为无霉烂、无病虫害的海南文昌本地高种老椰，经破壳得到的白色固体胚乳。

24、其中，所述静置发酵，其发酵条件为：37 ℃下静置发酵2~12 h；所述低温后熟，其条件为：4℃下后熟8~12 h。

25、优选的，所述静置发酵，其发酵条件为：37 ℃下静置发酵12 h；所述低温后熟，其条件为：4℃下后熟12 h。

26、上述利用所述发酵乳杆菌制备发酵椰浆饮料的方法制备得到的发酵椰浆饮料也在本发明所保护的范围之内。

27、具体的，所述发酵椰浆饮料有助于降低体内血糖血脂，维持血糖血脂健康水平。

28、有益效果：

29、（1）经过分离纯化，本发明筛选到了一株新的发酵乳杆菌 limosilactobacillus  fermentumhn-8。该菌株具有良好的表面疏水性、自聚能力、耐酸能力、耐胆盐能力；同时具有较高的人工肠液耐受性，能够在胃肠道中存在一定的抗逆性，从而发挥其益生功能；还对淀粉酶和胰脂肪酶具有抑制作用。

30、（2）利用本发明获得的发酵乳杆菌制备得到的发酵椰浆饮料具有多种生物学活性，且与乳酸菌相容性与适应性较好，能够促进乳酸菌的增殖。椰浆通过微生物发酵后进而产生新的有机酸来抑制有害菌的生长，同时生成挥发性化合物使得椰浆风味醇香，口感细腻，降低糖含量且显著提高了蛋白含量。

31、（3）本发明通过降血糖和降血脂作用研究证明发酵乳杆菌能够与椰浆协同作用，制备的发酵椰浆饮料在抑制淀粉酶活性和抑制胰脂肪酶活性方面具有显著优势，为开发有助于降低体内血糖血脂，维持血糖血脂健康水平的食品提供了一种新方案。