一种分泌抗牦牛IgG的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种分泌抗牦牛igg的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与应用。

背景技术：

1、随着我国经济的发展和对于食品质量意识的提高。牦牛作为一种特定用途的经济动物，在纺织业、食品工业和旅游业等行业中产生的价值也在逐年提高。相较于其他家养动物，针对牦牛的抗体、疫苗和诊断制品等生物制品种类非常匮乏，给牦牛疫病(例如布鲁氏菌病(简称布病))的防控造成困难。

2、免疫球蛋白igg是机体产生的最为重要的免疫球蛋白，是免疫球蛋白的主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75％。igg是体内最主要的抗体，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫调节的功能，igg的变化往往预示着疫病发生与发展的变化。

3、igg具有明显的种属特异性，即每种动物均具有各自独特的igg。从遗传关系来看，牦牛在家牛中处于一支独立的分支。研究表明，牦牛与家牛的遗传距离较近，但二者在基因组上存在明显差异。牦牛是牛属中的一个牛种，牛属包括了普通牛种(bos taurus)、瘤牛种(bos indicus)、牦牛种(bos grunniens)等15个种。牦牛与普通牛遗传学上的差异，在血清学诊断试剂的开发和应用上表现明显，将用于普通家养牛疾病检测的间接elisa试剂盒，直接用在牦牛的诊断上，反应性大幅度降低，无法使用，其中最为主要的原因是，试剂盒中针对普通牛igg的酶标二抗与牦牛血清中的igg反应弱，如将其换成适量浓度的抗牦牛igg的酶标二抗，elisa反应结果明显改善。

4、目前国内外还没有针对牦牛igg的单克隆抗体及其制品，针对牦牛各种血清学的诊断方法在国内外一直处于空白状态，严重制约牦牛疫病的血清学诊断和疫病防控技术的发展。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述不足，本发明的目的在于提供一种抗牦牛igg杂交瘤细胞ef37株。该抗牦牛igg杂交瘤细胞ef37株能够实现对抗牦牛igg的单克隆抗体的高效稳定分泌，该抗牦牛igg的单克隆抗体可用于牦牛igg和牦牛相关疫病的检测。

2、本发明提供了一种杂交瘤细胞株，它的保藏编号为cgmcc no.46011。

3、本发明还提供了一种抗牦牛igg的单克隆抗体，其特征在于，它由上述的杂交瘤细胞株分泌得到。

4、进一步地，所述抗牦牛igg的单克隆抗体属于igg1亚型。

5、本发明还提供了一种制备上述抗牦牛igg的单克隆抗体的方法，所述方法包括以下步骤：将上述杂交瘤细胞株注射到小鼠的腹腔中，饲养，抽取腹水，纯化，得到抗牦牛igg的单克隆抗体。

6、本发明还提供了一种免疫检测试剂盒，它包含上述抗牦牛igg的单克隆抗体。

7、进一步地，所述免疫检测试剂盒是酶联免疫吸附试剂盒。

8、本发明还提供了上述抗牦牛igg的单克隆抗体、上述免疫检测试剂盒在制备检测牦牛igg的试剂中的用途。

9、进一步地，所述检测牦牛igg的试剂为检测牦牛疫病的试剂。

10、进一步地，所述疫病为布鲁氏菌病。

11、本发明的有益效果为：

12、1.本发明通过对牦牛igg蛋白fc段部分序列的原核表达、纯化，免疫小鼠，制备单克隆抗体，筛选获得了一种能够稳定高效分泌抗牦牛igg单克隆抗体的杂交瘤细胞株(即抗牦牛igg杂交瘤细胞ef37株)，该抗牦牛igg杂交瘤细胞ef37株能够高效稳定分泌抗牦牛igg的单克隆抗体，弥补了国内外无专门针对牦牛igg单克隆抗体的困境。

13、2.本发明制备的抗牦牛igg的单克隆抗体对牦牛igg反应效果好，抗体效价在1:10000以上。

14、3.本发明制备的抗牦牛igg的单克隆抗体与其他动物的免疫球蛋白均无交叉反应性。

15、4.本发明制备的抗牦牛igg的单克隆抗体应用于牦牛布病抗体检测时，所建立的试剂盒的敏感性和特异性均在95％以上。

16、5.本发明制备的抗牦牛igg的单克隆抗体可以用于牦牛相关生物学和疫病的研究和检测，应用前景广阔。

17、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

18、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，它的保藏编号为cgmcc no.46011。

2.一种抗牦牛igg的单克隆抗体，其特征在于，它由权利要求1中所述的杂交瘤细胞株分泌得到。

3.根据权利要求2所述的抗牦牛igg的单克隆抗体，其特征在于，它属于igg1亚型。

4.一种制备权利要求2-3任一项所述抗牦牛igg的单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将权利要求1所述的杂交瘤细胞株注射到小鼠腹腔中，饲养，抽取腹水，纯化，得到抗牦牛igg的单克隆抗体。

5.一种免疫检测试剂盒，其特征在于，它包含权利要求2-3任一项所述抗牦牛igg的单克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的免疫检测试剂盒，其特征在于，它是酶联免疫吸附试剂盒。

7.权利要求2-3任一项所述抗牦牛igg的单克隆抗体、权利要求5所述的免疫检测试剂盒在制备检测牦牛igg的试剂中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述检测牦牛igg的试剂为检测牦牛疫病的试剂。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述疫病为布鲁氏菌病。