一种肠杆菌HNYJ-4及其在烟草中的应用的制作方法

本发明涉及微生物，特别涉及一种肠杆菌hnyj-4及其在烟草中的应用。

背景技术：

1、烟叶中的香气物质的来源主要有原有香气物质和香气前体物质转化。香气前体物质包括大分子烷烃、类胡萝卜素、西柏烷类、糖苷、糖酯、多酚等，这类香气前体物质通过烟叶在加工过程中会有一定程度的降解、转化，从而产生香气物质，但一般降解都不够充分，导致很多烟叶香气不足。其中，对于部分多酚物质来说，如含量过高，会导致烟叶涩感增加，杂气增多，充分降解可有效提升烟叶吸食口感。

2、目前的方法大多通过传统的烟叶加工工艺促进香气前体物质转化，最主要的手段是控制烤制温度和烤制时间，效果一般。微生物能够产生丰富的大分子降解酶类，如氧化还原酶、糖苷酶、糖基转移酶、酯酶等，能够高效、针对性降解烟叶中的香气前体物，从而提高烟叶香气。目前，关于类胡萝卜素、西柏烷类微生物的研究较多，而关于烟草中糖苷、多酚、其他萜烯类物质降解的研究尚少。

3、本发明提供一种可降解部分烟叶萜烯类糖苷和部分多酚类物质的微生物，可有效提高烟叶品质。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种肠杆菌hnyj-4及其在烟草中的应用，解决了烟叶香气前体物质降解不充分，香气不足等技术问题。

2、本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

3、一种肠杆菌hnyj-4，分类学命名为：enterobacter sp.hnyj-4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.29655。

4、一种肠杆菌hnyj-4在降解烟草中萜烯类糖苷和多酚类物质中的应用，所述应用为利用肠杆菌hnyj-4降解烟草中萜烯类糖苷和多酚类物质，从而提升烟草品质。

5、优选地，所述肠杆菌hnyj-4的16s rdna的核苷酸序列如seq id no.1所示

6、一种利用肠杆菌hnyj-4提升烟草品质的方法，包括以下步骤：

7、(1)制备肠杆菌hnyj-4的种子液；

8、(2)将种子液按照质量比为1:20-1：1000的比例喷施到初烤后的上部烟叶上；

9、(3)将喷施后的烟叶放置在20-40℃、湿度40％-80％的条件下静置1-5天以充分发酵；

10、(4)50-120℃灭活1-60min。

11、优选地，步骤(1)的种子液通过以下步骤制备：

12、(11)将烟叶与水按质量比1:2-1:20混合；

13、(12)在30-100℃的温度下搅拌提取0.5-12h，搅拌转速50rpm，200目纱布过滤，滤液为烟草水提液；

14、(13)将烟草水提液在121℃灭菌30min，得到烟草培养基；

15、(14)将肠杆菌hnyj-4单菌落接种到烟草培养基中，在25-45℃、100-200r/min的条件下摇床培养6-36h，得到种子液。

16、优选地，步骤(1)中：

17、(11)将烟叶与水按质量比为1:10混合；

18、(12)在60℃的温度下搅拌提取1.5h，搅拌转速50rpm，200目纱布过滤，滤液为烟草水提液；

19、(13)将烟草水提液在121℃灭菌30min，得到烟草培养基；

20、(14)将肠杆菌hnyj-4单菌落接种到烟草培养基中，在37℃、160r/min的条件下摇床培养12h，得到种子液。

21、优选地，所述种子液的od600值在1.5-2.5之间。

22、优选地，步骤(2)中，种子液与初烤后的上部烟叶的质量比为1：200。

23、优选地，步骤(3)中，发酵条件为37℃、湿度70％、室内静置2d，烟片堆叠不超过5cm。

24、优选地，步骤(4)中，70℃灭活20min。

25、本发明上述技术方案，具有如下有益效果：

26、(1)本申请的肠杆菌hnyj-4，能够有效降解、转化烟草中的部分由单帖、倍半萜、二萜等小分子萜组成的糖苷类物质，提高相应萜烯类香气成分含量，增加烟草香气。

27、(2)该菌株可以在一定程度降解绿原酸、云香苷和4-邻咖啡基喹啉酸等多酚类物质，降低烟草吸食的涩感。

28、(3)此外，通过微生物发酵处理，烟叶的香气质和香气量得到提升，杂气减少，余味改善，整体感官评价得分提高，实现了烟叶品质的优化。

1.一种肠杆菌hnyj-4，其特征在于，分类学命名为：enterobacter sp.hnyj-4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.29655。

2.一种根据权利要求1所述的肠杆菌hnyj-4在降解烟草中萜烯类糖苷和多酚类物质中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肠杆菌hnyj-4的16s rdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.一种利用权利要求1所述的肠杆菌hnyj-4提升烟草品质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，步骤(1)的种子液通过以下步骤制备：

6.根据权利要求5所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，步骤(1)中：

7.根据权利要求5所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，所述种子液的od600值在1.5-2.5之间。

8.根据权利要求5所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，步骤(2)中，种子液与初烤后的上部烟叶的质量比为1：200。

9.根据权利要求5所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，步骤(3)中，发酵条件为37℃、湿度70％、室内静置2d，烟片堆叠不超过5cm。

10.根据权利要求5所述的利用变栖克雷伯氏菌hnyj-3提升烟草品质的方法，其特征在于，步骤(4)中，70℃灭活20min。