一种长链非编码RNA的甲基化修饰在治疗类风湿关节炎中的应用

本发明属于类风湿关节炎分子生物学领域，具体是一种长链非编码rna的甲基化修饰在治疗类风湿关节炎中的应用。

背景技术：

1、类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,ra)是一种慢性、炎症性、进展性、自身免疫性疾病，发病率高、致残率高，累及多系统病变，病程缠绵难愈，患者生活质量降低。ra全球发病率约为0.3％-1％，女性发病率高于男性，男女发病比约为1：3，其确切发病机制目前尚不完全清楚，临床上尚缺乏特效疗法。因此，探究ra的发病机制和新的潜在治疗靶点，寻找ra有效药物，具有重大的实用价值和较高的社会效益。

2、长链非编码rna(longnon-codingrna,lncrna)一类长度超过200nt，且不编码蛋白的rna，能在表观遗传、转录及转录后水平上调控基因表达，参与包括ra在内的多种疾病的增殖、凋亡及氧化应激等多个生物学过程。6-甲基腺嘌呤(n6-methyladenosine，m6a)修饰是指发生在碱基a第六位n原子上，是真核生物mrna和lncrna最常见的修饰之一，通过促进前体rna剪切、mrna 翻译和增强rna稳定性等途径，参与ra发病，是目前rna表观遗传学中的研究热点与难点，受到国内外学者的广泛关注。肥胖相关蛋白(fto)作为m6a修饰主要的去甲基化酶，定位于细胞核，可与多种类型的rna结合并将其去甲基化，如mrna、snrna和trna等，当fto发挥去甲基化作用时，m6a修饰的原始位点不能被m6a结合蛋白识别，从而影响rna的剪接、成熟、翻译或降解。

3、滑膜组织异常增生及炎性细胞浸润是ra重要病理特征。成纤维样滑膜细胞(fls)是滑膜组织重要构成部分，是ra发病的关键效应细胞，具有类似于肿瘤细胞样侵袭作用，细胞凋亡逃逸是ra发病的重要诱因，fls还能分泌大量炎症细胞因子，破坏ra骨质，最终导致关节畸形、功能障碍。因此，探究与ra炎症或凋亡相关的lncrna的甲基化修饰对于解释ra的发病机制具有很大的临床应用价值。

技术实现思路

1、本发明通过实验研究获得lncrna即lncrnaenst00000619282的甲基化修饰的转移酶fto，确定enst00000619282m6a修饰与细胞凋亡有关，并且通过实验研究技术发现该lncrna结合蛋白有潜力成为促进ra细胞凋亡的新靶点。

2、本发明所采用的技术方案为：

3、首先，本发明提出了一种长链非编码rna的甲基化修饰在治疗类风湿关节炎中的应用，其中，所述长链非编码rna为lncrna enst00000619282。

4、其次，本发明还提出了一种该长链非编码rna的甲基化修饰在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。具体为，这种长链非编码rna的甲基化修饰能够应用在制备治疗与ra细胞凋亡的药物，这种lncrna enst00000619282能够在去甲基化转移酶fto的修饰下，与目的蛋白puf60结合，从而抑制细胞凋亡。

5、具体而言，本发明首先通过sramp(http://www.cuilab.cn/sramp)预测得到enst00000619282有2个甲基化修饰位点；通过比色法检测出ra外周血单个核细胞(pbmcs)与fls共培养细胞(简称共培养细胞)中m6a水平降低；rt-qpcr检测得出fto、enst00000619282在共培养细胞中的rna表达升高；wb检测得出fto在共培养中的蛋白表达升高；干扰fto后，enst00000619282表达降低；merip-qpcr检测得出enst00000619282m6a在共培养细胞中表达降低。同时，通过放射菌素d实验沉默fto后lncrnaenst00000619282mrna的半衰期缩短，稳定性下降，过表达fto后lncrnaenst00000619282具有更强的稳定性。干扰enst00000619282，促凋亡蛋白bax表达下降、抑凋亡蛋白bcl-2表达升高；过表达enst00000619282，促凋亡蛋白bax表达升高、抑凋亡蛋白bcl-2表达下降。另外，本发明还通过rnapull down实验技术确定puf60为lncrnaenst00000619282的下游靶基因。

6、另外，本发明还在临床中验证了enst00000619282在ra患者中表达升高，通过相关性分析表明fto与enst00000619282呈正相关关系，院内制剂中药复方新风胶囊(xfc)干预后，enst00000619282表达下降。

7、因此，本发明研究提示lncrna enst00000619282甲基化参与ra细胞凋亡的发病机制，有潜力成为促进ra细胞凋亡的新靶点。

1.一种长链非编码rna的甲基化修饰在治疗类风湿关节炎中的应用，其特征在于，所述长链非编码rna为lncrna enst00000619282。

2.一种长链非编码rna的甲基化修饰在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用，其特征在于，所述长链非编码rna为lncrna enst00000619282。

3.一种长链非编码rna的甲基化修饰在制备治疗与类风湿关节炎细胞凋亡的药物中的应用，其特征在于，所述长链非编码rna为lncrna enst00000619282。

4.如权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，所述lncrna enst00000619282在去甲基化转移酶fto的修饰下，与目的蛋白puf60结合，抑制细胞凋亡。