渐狭蜡蚧菌产孢培养基及其应用

本发明属于生物。具体涉及渐狭蜡蚧菌产孢培养基及其应用。

背景技术：

1、地球上近一半的已知昆虫是草食性害虫，它们直接取食农作物，并间接导致植物病害的传播。目前，最普遍的害虫控制方法是施用化学杀虫剂，然而，由于对农药残留的担忧，需要研发环境友好且成本效益高的害虫控制新策略。昆虫病原真菌是一类特异的寄生微生物，具有感染并最终杀死昆虫和其他节肢动物的卓越能力，是虫害控制最有效的天然选择之一(ma,m.,luo,j.,li,c.,eleftherianos,i.,zhang,w.,xu,l.,2024.a life-and-death struggle:interaction of insects with entomopathogenicfungi acrossvarious infection stages.front.immunol.14:1329843)。

2、lecanicillium属于hypocreales目，是一种昆虫病原真菌，对多种植物害虫具有生物防治能力，包括蚜虫、粉虱、蓟马和线虫等(liu,s.,li,j.,feng,q.,chu,l.,tan,z.,ji,x.,jin,p.,2023.insecticidal effect of the entomopathogenic funguslecanicillium araneicola hk-1in aphis craccivora(hemiptera:aphididae).insects14,860)。昆虫病原真菌产生的分生孢子接触昆虫后，会通过酶解和物理作用穿透角质层，随后在昆虫组织内繁殖，导致宿主死亡，随后，菌丝从尸体中萌发，产生休眠或感染性孢子，促进真菌传播(boomsma,j.j.,jensen,a.b.,meyling,n.v.,eilenberg,j.,2014.evolutionary interaction networks of insect pathogenicfungi.annu.rev.entomol.59,467-485.)。

3、因此，产孢培养基的优化对于提高渐狭蜡蚧菌这种昆虫病原真菌的生物防治效果至关重要。通过调整培养基中的营养成分等条件，可以显著促进分生孢子的产生，从而增强真菌对害虫的侵染能力和致死率，减少化学农药的使用，推动农业可持续发展。此外，培养基的优化还有助于提高生产效率，降低成本，使得生物防治技术更加经济实用，为农业安全生产提供一种环保、高效的解决方案。

技术实现思路

1、针对现有技术的问题，尤其是针对保藏号:cgmcc no.40860的渐狭蜡蚧菌进行研究和优化产孢，获得渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基及其培养所述渐狭蜡蚧菌的方法。

2、本发明提供一种渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基，其包括如下组分，酵母提取物4-6g/l，葡萄糖8-12g/l，余量为无菌水。

3、优选地，包括如下组分，酵母提取物5g/l，葡萄糖10g/l，余量为无菌水。

4、本发明进一步提供一种所述渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基的制备方法，其按照配方比例称量各组分，混合溶解后，121℃灭菌20min，得渐狭蜡蚧菌优化产孢培养基。

5、本发明提供一种培养渐狭蜡蚧菌的产孢方法，其包括如下步骤：从渐狭蜡蚧菌新鲜菌落边缘切取1-2×1-2mm大小的菌丝块，接种于如权利要求1或2所述基于渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基上培养。

6、优选地，所述培养是置于26-30℃摇床培养，摇床转速180-250rpm，培养60-90h。

7、进一步优选地，所述培养是置于28℃摇床培养，摇床转速220rpm，培养70-75h。

8、任选地，培养后还包括过滤去除菌丝及菌丝块，得渐狭蜡蚧菌分生孢子液，任选还置于4℃保存备用。

9、特别优选地，所述的渐狭蜡蚧菌保藏号为cgmcc no.40860。其中，所述所述的渐狭蜡蚧菌分类命名为渐狭蜡蚧菌(lecanicilliumattenuatum)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期:2023年10月25日，保藏号:cgmcc no.40860，保藏菌株名称为渐狭蜡蚧菌3166，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

10、本发明提供所述的基于渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基在培养渐狭蜡蚧菌产孢中的应用。优选地，所述的渐狭蜡蚧菌保藏号:cgmcc no.40860。

11、本发明提供优化培养基在初期(12小时)的孢子数较低，但随着培养时间的延长，其孢子数逐渐增加，显示出良好的生长潜力。在48小时至72小时期间，优化培养基的孢子数显著增加，表明其能够支持真菌的持续生长和产孢。通过对比三种培养基的整体表现，本发明的优化培养基在促进渐狭蜡蚧菌的生长和产孢方面具有明显优势，尽管cm培养基处理吸光度高于优化培养基，但72小时产孢量没有显著差异。但由于优化培养基配方简单、配制方便，因此，本发明优化培养基是优化产孢培养基的理想选择，有助于提高基于渐狭蜡蚧菌的生物防治制剂的生产效率和应用效果。同时，后续进一步试验证实，三种培养基产生的渐狭蜡蚧菌孢子对有害昆虫的毒力没有显著差异。

1.一种渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基，其特征在于，包括如下组分，酵母提取物4-6 g/l，葡萄糖8-12 g/l，余量为无菌水。

2.如权利要求1所述的渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基，其特征在于，包括如下组分，酵母提取物5 g/l，葡萄糖10 g/l，余量为无菌水。

3.一种如权利要求1所述渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基的制备方法，其特征在于，按照配方比例称量各组分，混合溶解后，121℃灭菌20 min，得渐狭蜡蚧菌优化产孢培养基。

4.一种培养渐狭蜡蚧菌的产孢方法，其特征在于，包括如下步骤：从渐狭蜡蚧菌新鲜菌落边缘切取1-2×1-2 mm大小的菌丝块，接种于如权利要求1或2所述基于渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基上培养。

5.如权利要求4所述的产孢方法，其特征在于，所述培养是置于26-30℃摇床培养，摇床转速180-250 rpm，培养60-90 h。

6.如权利要求5所述的产孢方法，其特征在于，所述培养是置于28℃摇床培养，摇床转速220 rpm，培养70-75 h。

7.如权利要求4至6任一项所述的产孢方法，其特征在于，培养后还包括过滤去除菌丝及菌丝块，得渐狭蜡蚧菌分生孢子液，任选还置于4℃保存备用。

8.如权利要求4至6任一项所述的产孢方法，其特征在于，所述的渐狭蜡蚧菌保藏号:cgmcc no. 40860。

9.权利要求1或2所述的基于渐狭蜡蚧菌优化的产孢培养基在培养渐狭蜡蚧菌产孢中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的渐狭蜡蚧菌保藏号:cgmcc no.40860。