一株解淀粉芽孢杆菌及在防治芍药叶斑病中的应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及在防治芍药叶斑病中的应用。

背景技术：

1、芍药(paeonia lactiflora pall.)作为一种多年生草本植物，以其独特的观赏价值和药用价值而被广泛种植。但是芍药在生长与栽培过程中，常受到多种植物病害的侵扰，其中叶斑病是最为常见且危害严重的一种真菌性病害，主要由芍药尾孢菌(cercosporapaeoniae)引起的，表现为叶片出现斑点，严重时会导致整个叶片枯死，严重影响植株的观赏价值和药用价值。

2、传统的化学防治方法虽然在一定程度上可以有效控制病害的发生和扩散，但长期大量使用化学农药不仅造成环境污染，还可能对人类健康产生潜在风险，同时会使病菌产生抗药性，导致化学防治的难度增加。为了解决这些问题，生物防治技术逐渐成为研究的热点，生物防治即是利用生防菌的天然作用来控制或消灭病害，这种方法具有环保、高效、无抗药性等优点。在这些生防菌中，解淀粉芽孢杆菌属表现出了极佳的防病性能，如，刘永峰等发现解淀粉芽孢杆菌b1619对连作西瓜生长及枯萎病发生具有一定的抑菌防治效果(王夏雯,孟佳丽,刘永锋,等.解淀粉芽孢杆菌b1619对连作西瓜生长及枯萎病发生的影响[j].福建农业学报,2019,34(11))；史一然等发现解淀粉芽孢杆菌lzn01对西瓜专化型尖孢镰刀菌具有显著抑制效应(史一然,徐伟慧,吕智航,等.解淀粉芽孢杆菌lzn01对西瓜专化型尖孢镰刀菌的抑制效应[j].江苏农业科学,2019,47(12))。然而目前鲜有提到对芍药叶斑病有抑制效果的相关研究，芍药等观赏植物的健康生长缺乏环保、长期、有效的防病解决方案。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌及在防治芍药叶斑病中的应用。本发明首先自黄河滩涂的泥样分离、筛选到一株高效拮抗芍药叶斑病病原芍药尾孢菌(cercospora paeoniae)的解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)fzd-02，然后进一步制备成可湿性粉剂。经大田实验证明，本发明制备的解淀粉芽孢杆菌fzd-02可湿性粉剂对芍药叶斑病具有良好的防治效果，表现出较好的生防应用潜力。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明首先自黄河滩涂的泥样分离、筛选到一株高效拮抗芍药叶斑病病原芍药尾孢菌(cercospora paeoniae)的解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)fzd-02，此菌株已于2022年12月08日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为cgmccno.26141。该菌株在na培养基上菌落形态为规则圆形，前期表面湿润光滑，粘稠，不透明；后期表面有褶皱凸起、呈乳白色，产芽孢且为中生芽孢。

4、本发明提供了上述的解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)fzd-02在拮抗芍药叶斑病病原芍药尾孢菌(cercospora paeoniae)，防治芍药叶斑病中的应用。

5、本发明还提供一种解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)fzd-02的可湿性粉剂，其特征是，包括以下步骤：

6、(1)一级种子液制备

7、取活化的解淀粉芽孢杆菌fzd-02接种于nb培养基中，37±0.5℃震荡培养18～20h，测得od600为0.5～0.8之间时停止培养，所得菌液即为一级种子液；

8、(2)二级种子液制备

9、将培养好的一级种子液(按接种体积比0.5～1％)接入二级种子液培养基中进行发酵；发酵条件：温度37±0.5℃、ph7.0～7.2、发酵时间14～16h，制成二级种子液；

10、(3)解淀粉芽孢杆菌fzd-02母液制备

11、将培养好的二级种子液(按接种体积比5～10％)接入发酵培养基中进行发酵；发酵条件：温度37±0.5℃、ph7.0～7.2；发酵终点：芽孢率≥90％；停罐，获得解淀粉芽孢杆菌fzd-02母液(发酵液)；

12、(4)可湿性粉剂制备

13、将解淀粉芽孢杆菌fzd-02母液按照1:0.05～0.06的质量比与载体混合，然后进行喷雾干燥获得解淀粉芽孢杆菌fzd-02母粉；然后进一步制备成可湿性粉剂。

14、进一步的，所述喷雾干燥控制进风温度178～180℃，出风温度170～175℃。

15、进一步的，所述可湿性粉剂配方(质量比)：fzd-02母粉12～15％，烷基萘磺酸缩聚物钠盐(morwet d－425)7～8％，羧甲基纤维素钠(cmc－na)1.5～2％，表面活性剂(如吐温80)3～5％，硅藻土66～70％，凹凸棒土补齐100％。制备方法：将解淀粉芽孢杆菌fzd-02母粉与烷基萘磺酸缩聚物钠盐、羧甲基纤维素钠、表面活性剂、硅藻土和凹凸棒土混匀，然后经气流粉碎机粉碎制备得到解淀粉芽孢杆菌fzd-02的可湿性粉剂。

16、其中，二级种子液培养基为：玉米粉1.0％、豆粕粉1.0％、(nh4)2so4 0.5％、mgso4·7h2o0.1％、k2hpo4·3h2o 0.02％、kh2po4 0.01％，其余为水，ph为7.2～7.5。发酵培养基：同二级种子液培养基。

17、本发明还提供了上述的解淀粉芽孢杆菌fzd-02可湿性粉剂在防治芍药叶斑病中的应用。

18、本发明的有益效果：本发明筛选得到的解淀粉芽孢杆菌fzd-02对芍药叶斑病具有良好的防治效果且防治效果较为稳定，稀释300倍的fzd-02可湿性粉剂防效达75.9％，对于减少化学杀菌剂的使用，降低农药污染具有重要意义。

1.一株解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)fzd-02，其特征是，其保藏编号为cgmcc no.26141。

2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌fzd-02在拮抗芍药叶斑病病原芍药尾孢菌，防治芍药叶斑病中的应用。

3.一种解淀粉芽孢杆菌fzd-02的可湿性粉剂，其特征是，以权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌fzd-02为主要有效成分。

4.权利要求3所述的可湿性粉剂的制备方法，其特征是，具体包括以下步骤：

5.如权利要求4所述的可湿性粉剂的制备方法，其特征是，

6.如权利要求4所述的可湿性粉剂的制备方法，其特征是，

7.如权利要求4所述的可湿性粉剂的制备方法，其特征是，所述步骤(4)喷雾干燥控制进风温度178～180℃，出风温度170～175℃。

8.权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌fzd-02可湿性粉剂在防治芍药叶斑病中的应用。