与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的KASP分子标记及其应用

本发明属于作物遗传育种，具体地说，本发明涉及一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记及其应用。

背景技术：

1、南瓜(cucurbit moschata)是葫芦科重要的瓜类作物之一，在居民膳食结构中扮演着重要角色，具有广阔的市场前景和重要经济价值。

2、果实香味能够吸引消费者的关注，刺激消费欲望，同时香味也是南瓜风味品质的重要指标。香味物质2-乙酰-1-吡咯啉(2-ap)在特殊的南瓜资源中存在，赋予南瓜特殊香味品质，前期研究发现该物质在果实与叶片中均能被检测到。此外，2-ap也是特殊香型冬瓜、黄瓜的特征贡献物。检测2-ap物质，需要利用gc-ms技术，需要的时间、耗费多。通过基因型判断，可以快速筛选到有2-ap这种物质的材料，效率大幅度提升。

3、因此，十分有必要深入挖掘、利用与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉紧密连锁的分子标记，以促进含有2-ap物质的南瓜新种质资源创制和新品种选育，加快南瓜分子育种进程。

技术实现思路

1、基于此，本发明的目的在于提供了一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记及其应用；利用本发明的kasp分子标记可以很好地将含有2-ap与不含有2-ap的南瓜单株分型。

2、实现上述发明目的的具体技术方案包括如下。

3、本发明的第一方面，提供了一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记在检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源中的应用，所述kasp分子标记位于中国南瓜基因组10号染色体的712637位，该处碱基为t或c。

4、本发明的第二方面，提供了一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物，包括序列如seq id no:1所示的上游引物f、序列如seq id no:2所示的下游引物ra、以及序列如seq id no:3所示的下游引物rg。

5、本发明的第三方面，提供了与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物在检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源、含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜品种辅助育种、或制备检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的试剂盒中的应用。

6、本发明的第四方面，提供了一种检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的试剂盒，包括上述与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物。

7、本发明的第五方面，提供了一种检测含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测南瓜的dna作为模板，以上述扩增引物进行pcr扩增后，分析基因分型数据。

8、本发明的第六方面，提供了一种筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的方法，包括以下步骤：以待测南瓜的dna作为模板，以上述扩增引物进行pcr扩增后，筛选基因型为tt的南瓜种质资源。

9、本发明通过含有香味物质2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜资源和不含有香味物质2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜资源创制f2分离群体，构建高密度连锁遗传图谱，在10号染色体712637处发现一个snp位点，该位点处在含有香味物质2-乙酰-1-吡咯啉物的南瓜种质资源中为t，在不含有香味物质2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源中为c，因此，其是一个与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记，该kasp分子标记及其扩增引物组能够准确检测南瓜种质资源中是否含有香味物质2-乙酰-1-吡咯啉，可以有效提高香味物质判断效率，减少非目标育种资源的种植人力、物力、财力。

1.一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记在检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源中的应用，所述kasp分子标记位于中国南瓜基因组10号染色体的712637位，该处碱基为t或c。

2.一种与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物，其特征在于，包括序列如seq id no:1所示的上游引物f、序列如seq id no:2所示的下游引物ra、以及序列如seq id no:3所示的下游引物rg。

3.权利要求2所述的与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物在检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源中的应用。

4.权利要求2所述的与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物在含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜品种辅助育种中的应用。

5.权利要求2所述的与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物在制备检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的试剂盒中的应用。

6.一种检测或筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的与南瓜香味物质2-乙酰-1-吡咯啉连锁的kasp分子标记的扩增引物。

7.一种检测含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测南瓜的dna作为模板，以权利要求2所述扩增引物进行pcr扩增后，分析基因分型数据。

8.根据权利要求7所述的检测含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的方法，其特征在于，所述分析基因分型数据包括以下步骤：基因型为tt时，待测南瓜含有2-乙酰-1-吡咯啉；基因型为cc或ct时，待测南瓜不含2-乙酰-1-吡咯啉。

9.一种筛选含2-乙酰-1-吡咯啉的南瓜种质资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测南瓜的dna作为模板，以权利要求2所述扩增引物进行pcr扩增后，筛选基因型为tt的南瓜种质资源。

10.根据权利要求7～9任一项所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系包括：2x parms mastermix 5.0±0.1μl、9μm～11μm上游引物f 0.4μl±0.01μl、9μm～11μm下游引物ra 0.15μl±0.01μl、9μm～11μm下游引物rg 0.15μl±0.01μl、dna模板10ng～100ng、ddh2o加至10μl；和/或，