一种核苷酸类化合物的纯化方法与流程

本发明属于核苷酸，具体涉及一种核苷酸类化合物的纯化方法。

背景技术：

1、核苷酸是一类由嘌呤或嘧啶碱基、核糖或脱氧核糖以及磷酸基团组成的化合物。核苷酸类化合物广泛应用于食品、医药、农业行业，各类核苷酸产品的市场需求巨大。

2、目前化学合成核苷酸的生产纯化方法的一般方法是先进行离子交换树脂洗脱纯化，然后再进行反相柱层析纯化，最后经浓缩或纳滤得到产物。产物纯度能够达到95％～99％。但这种核苷酸类化合物的纯化方法比较适用于毫克到克量级的产品制备，不适用于百克到公斤级的产品纯化。而且采用反相制备纯化溶剂消耗巨大，且反相柱的上样量较小，填料及高压泵设备昂贵，纯化后收集产物的馏分体积大，还需经浓缩冻干才得到产物，生产周期长，成本高。

3、因此，需要开发一种能够有效纯化核苷酸类化合物，并用时短，成本低的核苷酸类化合物的纯化方法。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种核苷酸类化合物的纯化方法，所述核苷酸类化合物的纯化方法能够提高单一批次的纯化处理量，达到较高纯度，纯化用时短，有效缩短了产品的生产周期。

2、为达此目的，本发明采用以下技术方案：

3、本发明提供一种核苷酸类化合物的纯化方法，所述核苷酸类化合物的纯化方法包括以下步骤：将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，与碘化钠饱和溶液混合析出晶体，得到纯品。

4、本发明中，将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，与碘化钠饱和溶液混合析出晶体核苷酸钠盐，能够实现有效纯化获得纯品，示例性地，核苷酸粗品包括脱氧核糖核苷三磷酸粗品、双脱氧核糖核苷三磷酸粗品或含叠氮基的脱氧核糖核苷三磷酸粗品。所述核苷酸类化合物的纯化方法能够提高单一批次的纯化处理量，达到较高纯度，可达到≥99％的目标纯度，纯化用时短，有效缩短了产品的生产周期。

5、优选地，所述弱阴离子交换柱层析纯化后还包括浓缩的步骤。

6、优选地，所述弱阴离子交换柱的填料为deae填料。

7、优选地，所述弱阴离子交换柱层析纯化的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为纯水，所述流动相b为碳酸三乙胺水溶液。

8、优选地，所述碳酸三乙胺水溶液的浓度为0.5～2mol/l，例如0.7mol/l、0.9mol/l、1.1mol/l、1.3mol/l、1.5mol/l、1.7mol/l或1.9mol/l等。

9、优选地，所述碳酸三乙胺水溶液的ph为7～8，例如7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8或7.9等。

10、优选地，所述弱阴离子交换柱层析纯化的洗脱方式为梯度洗脱，流速为40～120ml/min，例如50ml/min、60ml/min、70ml/min、80ml/min、90ml/min、100ml/min或110ml/min等。

11、优选地，所述碘化钠饱和溶液的溶剂为丙酮。

12、本发明中，所述碘化钠饱和溶液意指10～35℃、101.325kpa条件下的碘化钠饱和溶液。

13、优选地，所述析出晶体的温度为10～35℃，例如13℃、16℃、19℃、22℃、25℃、28℃、31℃或34℃等。

14、优选地，所述混合还包括与乙醇或乙腈混合。

15、优选地，以碘化钠饱和溶液和乙醇或乙腈的总质量为100％计，所述碘化钠饱和溶液的质量百分比为90％～100％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％等)，乙醇或乙腈的质量百分比为0～10％(例如1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％或9％等)。

16、本发明中，以碘化钠饱和溶液和乙醇或乙腈的总质量为100％计，所述碘化钠饱和溶液的质量百分比优选为90％～100％，若碘化钠饱和溶液的质量百分比过低，则析晶不完全，纯化收率降低。

17、本发明中，通过调控结晶条件能提高纯化的纯度，达到核苷酸类化合物纯化的目的。

18、优选地，所述析出晶体后还包括过滤和丙酮洗涤的步骤。

19、优选地，所述核苷酸类化合物的纯化方法具体包括如下步骤：将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，浓缩，与碘化钠饱和溶液和任选地乙醇或乙腈混合析出晶体，过滤，丙酮洗涤，得到纯品。

20、所述弱阴离子交换柱的填料为deae填料，所述弱阴离子交换柱层析纯化的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为纯水，所述流动相b为浓度为0.5～2mol/l的碳酸三乙胺水溶液，所述弱阴离子交换柱层析纯化的洗脱方式为梯度洗脱，流速为40～120ml/min。

21、以碘化钠饱和溶液和乙醇或乙腈的总质量为100％计，所述碘化钠饱和溶液的质量百分比为90％～100％，乙醇或乙腈的质量百分比为0～10％。

22、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

23、本发明将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，与碘化钠饱和溶液混合析出晶体核苷酸钠盐，能够实现有效纯化获得纯品，所述核苷酸类化合物的纯化方法能够提高单一批次的纯化处理量，达到较高纯度，可达到≥99％的目标纯度，纯化用时短，有效缩短了产品的生产周期，生产周期为4天。

1.一种核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述核苷酸类化合物的纯化方法包括以下步骤：将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，与碘化钠饱和溶液混合析出晶体，得到纯品。

2.根据权利要求1所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述弱阴离子交换柱层析纯化后还包括浓缩的步骤；

3.根据权利要求1或2所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述弱阴离子交换柱层析纯化的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为纯水，所述流动相b为碳酸三乙胺水溶液。

4.根据权利要求3所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述碳酸三乙胺水溶液的浓度为0.5～2mol/l；

5.根据权利要求1-4任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述弱阴离子交换柱层析纯化的洗脱方式为梯度洗脱，流速为40～120ml/min。

6.根据权利要求1-5任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述碘化钠饱和溶液的溶剂为丙酮。

7.根据权利要求1-6任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述析出晶体的温度为10～35℃。

8.根据权利要求1-7任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述混合还包括与乙醇或乙腈混合；

9.根据权利要求1-8任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述析出晶体后还包括过滤和丙酮洗涤的步骤。

10.根据权利要求1-9任一项所述的核苷酸类化合物的纯化方法，其特征在于，所述核苷酸类化合物的纯化方法具体包括如下步骤：将核苷酸粗品通过弱阴离子交换柱层析纯化，浓缩，与碘化钠饱和溶液和任选地乙醇或乙腈混合析出晶体，过滤，丙酮洗涤，得到纯品；