Zm00001d014471基因在玉米提高大斑病抗性中的应用

本发明属于生物，具体涉及zm00001d014471基因在提高玉米大斑病抗性中的应用。

背景技术：

1、玉米是世界上种植最广泛的作物，是食品、饲料和工业原料的重要来源。玉米大斑病(大斑病)是由真菌病原菌exserhilum turcicum引起的一种主要的叶片病害，在世界范围内导致严重的产量损失，大斑病常发生在温度和湿度较高的地区，大斑病抗性是由多基因共同调控的数量性状，利用现代分子标记辅助育种技术尽可能多的从优良材料中聚集具有大斑病抗性的片段是当前育种的重要手段。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种zm00001d014471基因在玉米提高大斑病抗性中的应用，为玉米种质抗性改良提供新的方法。

2、为实现以上目的，本发明提供以下技术方案：

3、zm00001d014471基因在玉米大斑病抗病育种中的应用，所述zm00001d014471基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、优选的，所述zm00001d014471基因为过表达zm00001d014471基因。

5、优选的，所述玉米大斑病抗病育种的方法为，包括提高受体玉米中如seq id no.1所示的序列编码的蛋白质的含量和/或活性，使所述转基因玉米对大斑病的抗性高于所述受体玉米。

6、优选的，所述玉米大斑病抗病育种的方法为，在玉米大喇叭口期接种玉米大斑病免疫诱抗剂。

7、优选的，以水为溶剂，每1kg所述玉米大斑病免疫诱抗剂中包括：大斑病凸脐蠕孢菌菌液400～600ml、巨大芽孢杆菌的发酵上清液40～60ml、仲烷基磺酸钠0.5～0.8g、吐温80 0.1～0.3g、黄腐酸钾20～40g、芸苔素内酯5～9g。

8、优选的，所述大斑病凸脐蠕孢菌菌液的od600为0.3～0.5；所述巨大芽孢杆菌的保藏编号是cgmcc no.17573(属于现有技术菌种)。

9、优选的，所述巨大芽孢杆菌的发酵上清液的制备方法为：将巨大芽孢杆菌接种于培养基中培养，离心后取上清，得到巨大芽孢杆菌的发酵上清液。

10、优选的，所述巨大芽孢杆菌的接种量为1～2％；所述培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(南京杜莱生物技术有限公司)；所述培养的温度为26～28℃，所述培养的时间为5～7d。

11、优选的，所述离心的转速为5000～6000rpm，时间为5～7min。

12、优选的，所述玉米大斑病免疫诱抗剂的制备方法为：将大斑病凸脐蠕孢菌菌液、巨大芽孢杆菌的发酵上清液混合静置30～50min，然后加入仲烷基磺酸钠、吐温80、黄腐酸钾和芸苔素内酯混合。

13、本发明达到的技术效果为：

14、玉米大斑病(northern leafblight，大斑病)是一种常见的玉米叶部病害，研究表明培育抗病品种是防治大斑病的最有效途径。本发明利用797个家系构成的关联群体，大斑病鉴定到最大效应值的分子标记5-49193921所关联的基因zm00001d014471具有大斑病抗性。在接种大斑病菌后0d～20d的叶片中进行表达量分析，发现zm00001d014471表达量与大斑病抗性正相关。大斑病抗性是由多基因共同调控的数量性状，本发明提供的技术方案，为利用现代分子育种技术培育抗大斑病玉米新品种奠定了基础。

15、本发明制备的玉米大斑病免疫诱抗剂以大斑病凸脐蠕孢菌菌液作为抗原基液，加入的巨大芽孢杆菌菌液有很好的钝化效果。黄腐酸钾、芸苔素内酯则对玉米的生长有良好的促进作用。进一步提高玉米的抗逆性，缓解凸脐蠕孢菌带来的负面影响。仲烷基磺酸钠、吐温80作为乳化剂使用。

16、本发明提供的玉米大斑病免疫诱抗剂作为植物疫苗的一种，在玉米生长期进行接种后，可有效防止玉米大斑病，其防治效果与现有技术药物相当。

1.zm00001d014471基因在玉米大斑病抗病育种中的应用，其特征在于，所述zm00001d014471基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述zm00001d014471基因为过表达zm00001d014471基因。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述玉米大斑病抗病育种的方法为，包括提高受体玉米中如seq id no.1所示的序列编码的蛋白质的含量和/或活性，使所述转基因玉米对大斑病的抗性高于所述受体玉米。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述玉米大斑病抗病育种的方法为，在玉米大喇叭口期接种玉米大斑病免疫诱抗剂。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，以水为溶剂，每1kg所述玉米大斑病免疫诱抗剂中包括：大斑病凸脐蠕孢菌菌液400～600ml、巨大芽孢杆菌的发酵上清液40～60ml、仲烷基磺酸钠0.5～0.8g、吐温80 0.1～0.3g、黄腐酸钾20～40g、芸苔素内酯5～9g。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述大斑病凸脐蠕孢菌菌液的浓度为100,000～800,000个孢子/ml；所述巨大芽孢杆菌的保藏编号是cgmcc no.17573。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌的发酵上清液的制备方法为：将巨大芽孢杆菌接种于培养基中培养，离心后取上清，得到巨大芽孢杆菌的发酵上清液。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌的接种量为1～2％；所述培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；所述培养的温度为26～28℃，所述培养的时间为5～7d。

9.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述离心的转速为5000～6000rpm，时间为5～7min。

10.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述玉米大斑病免疫诱抗剂的制备方法为：将大斑病凸脐蠕孢菌菌液、巨大芽孢杆菌的发酵上清液混合静置30～50min，然后加入仲烷基磺酸钠、吐温80、黄腐酸钾和芸苔素内酯混合。