一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺的制作方法

1.一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述纯化工艺包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述新型宿主菌为通过将重组表达载体导入巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)cbs7435菌株而得到的表达基因重组hsa的工程菌，所述重组表达载体的核苷酸序列如seqid no：1所示。

3.根据权利要求2所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于，所述重组表达载体包含：

4.根据权利要求2所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：还包括

5.根据权利要求2所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述重组表达载体为ppic9、ppic3、ppiczαabc、ppic3.5k、phil-s1、phil-d2、pa0804、pa0815、pgapzαabc、ppic6αabc、ppic9k中的任意一种通过限制性内切酶saci或bglⅱ酶切后的线性化载体。

6.根据权利要求5所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述重组表达载体为hsa-ppic9k通过限制性内切酶saci或bglⅱ酶切后的线性化载体，其中至少含有一个拷贝的优化设计的编码人血清白蛋白的优化基因。

7.根据权利要求5所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述编码人血清白蛋白的优化基因中，选用巴斯德毕赤酵母醇氧化酶(aox1)基因偏爱的偏爱密码子并控制该基因偏爱密码子占编码的优化基因密码子总数的90％。

8.根据权利要求5所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述编码人血清白蛋白的优化基因中，在优化基因内部从5’至3’方向依次插入了sali、hind iii、xba i三个限制性内切酶位点，使优化基因相对均衡地被分割成四个大片段。

9.根据权利要求5所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述编码人血清白蛋白的优化基因中，减少连续的g-c配对，增加毕赤酵母偏爱的a-t配对，使优化基因内部的gc含量调整至45～50％。

10.根据权利要求5所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述编码人血清白蛋白的优化基因中，还包括表达阅读框架为

11.根据权利要求2所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述步骤s310中的发酵液通过如下步骤制备得到

12.根据权利要求11所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于，所述步骤s210的培养基包括如下组分：h3po4、caso4·2h2o、k2so4、mgso4·7h2o、koh、、生物素、氨水、98％glycerol或100％甲醇，及消泡剂。

13.根据权利要求12所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述h3po4的含量为26.7ml/l，所述caso4·2h2o的含量为0.47g/l，所述k2so4的含量为9.1g/l，所述mgso4·7h2o的含量为7.5g/l，所述koh的含量为4.13g/l，所述98％glycerol的含量为40g/l，所述甲醇在罐内发酵液里的浓度控制在0.2-0.9％，所述消泡剂的含量为0.5ml/l。

14.根据权利要求11所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述步骤s200中的电极标定具体为对发酵罐进行ph电极标定和溶氧电极标定。

15.根据权利要求11所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述步骤s230投料具体为将步骤s210制备的培养基混合液投入后，进行高温灭火冷却备用。

16.根据权利要求11所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述步骤s250的发酵包括基础培养阶段、过渡培养阶段和诱导表达阶段。

17.根据权利要求16所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述基础培养阶段具体为

18.根据权利要求17所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述过渡培养阶段具体为

19.根据权利要求18所述的一种高效获得高纯度重组人血清白蛋白的纯化工艺，其特征在于：所述诱导表达阶段具体为