一种SARS-CoV-2的crRNA、引物组、检测体系以及检测方法与流程
技术特征:
1.一种crrna,其特征在于,其核苷酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
2.一种raa扩增引物组,其特征在于,由如seq id no.3所示的上游引物和如seq idno.4所示的下游引物组成;或者由如seq id no.5所示的上游引物和如seq id no.6所示的下游引物组成。
3.一种sars-cov-2的crispr-cas13a检测体系,其特征在于,包括如权利要求1所述crrna和cas13a蛋白。
4.一种非疾病检测或治疗目的地sars-cov-2的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:以待测样本dna为模板,利用权利要求2所述raa扩增引物组进行扩增反应,再利用权利要求3所述crispr-cas13a检测体系对扩增产物进行酶切反应,根据反应完成后的荧光颜色判断待测样本中是否含有sars-cov-2。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述荧光颜色是在蓝光或紫外激发情况下观察反应完成后的荧光颜色。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,所述判断待测样本中是否含有sars-cov-2具体为:利用蓝光切胶仪读取,以阴性对照为参照,观测到发光组即为阳性;
7.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述扩增反应的反应体系为50μl,包括:反应干粉1管、abuffer 41.5μl、forward primer 2μl、reverse primer 2μl、rna样品2μl和b buffer2.5μl;
8.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述酶切反应的反应体系为20μl,包括:cleavage buffer 2μl、lwacas13aprotein 2μl、crrna 2μl、reporter 1μl、superase·in rnase inhibitor 1μl、t7 rnapolymerase(5u/μl)0.6μl、ribonucleotide solution0.8μl、mgcl22.4μl和扩增产物8.2μl;
9.一种检测sars-cov-2的产品,其特征在于,包括权利要求2所述raa扩增引物组和/或权利要求3所述crispr-cas13a检测体系。
技术总结
本发明公开了一种SARS‑CoV‑2的crRNA、引物组、检测体系以及检测方法,属于病毒检测技术领域。本发明建立的CRISPR‑Cas13a检测体系,利用Cas13a蛋白的非特异剪切活性,结合可以高效扩增目的片段的重组聚合酶扩增技术,该系统包含Cas13a、对应的靶向待检测病毒的sgRNA和包含一个切割后可发出荧光的报告RNA链;当Cas13蛋白识别到靶向RNA链时会切割相应的模板,随后激活了它的collateral cleavage附属活性,进而切割报告RNA并释放可检测的荧光信号,实现了对痕量核酸快速、廉价、高灵敏的检测,针对SARS‑CoV‑2最低检出限为1copy/μL。
技术研发人员:顾潮江
受保护的技术使用者:武汉潇正生物科技有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/12/2
技术研发人员:顾潮江
技术所有人:武汉潇正生物科技有限公司
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