沙门菌膜孔蛋白OmpC及其在检测中的应用

本发明涉及生物，更具体的，涉及沙门菌膜孔蛋白ompc及其在检测中的应用。

背景技术：

1、细菌能够通过调控孔蛋白和外排泵的表达来调节许多分子的进出。其中，孔蛋白也称为外膜蛋白(omp)，是嵌入革兰阴性细菌omp中的β-桶状蛋白，允许分子的被动扩散。孔蛋白还充当噬菌体和细菌素的受体，并与肽聚糖和lps一起在维持细菌细胞的完整性方面发挥重要作用。因此，omp表达水平的改变，进而导致外膜通透性的改变。

2、我国对细菌的omp研究的还较少。细菌ompc基因是一个编码细菌omp抗原的重要基因。膜孔蛋白ompc既可作为佐剂，同时也可以作为免疫刺激原得到应用。膜孔蛋白ompc可通过经典途径激活机体的免疫应答。所以制备并纯化出ompc蛋白用于沙门菌的检测以及后续沙门菌疫苗制备具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的上述问题，提供沙门膜孔蛋白ompc的制备方法。

2、本发明的第二个目的是提供上述沙门膜孔蛋白ompc在检测中的应用。

3、本发明的目的通过以下技术方案实现：

4、一种沙门膜孔蛋白ompc的制备方法，包括以下步骤：

5、s1、构建重组阳性转化子：以鸡白痢沙门菌atcc 9120的全基因组为模板扩增目的基因ompc，将目的基因ompc与质粒载体重组，后转化筛选得到重组阳性转化子；

6、s2、目的蛋白的表达和纯化：将重组阳性转化子菌株培养进行iptg诱导表达，诱导后的菌体沉淀重悬至含有8m尿素的缓冲液中，经破碎、过滤后纯化；所述iptg诱导条件为：iptg浓度100mm，诱导时间16h，诱导温度16℃；

7、s3、透析复性：将纯化后的蛋白分别依次在含有6m，4m，2m，1m，0m的透析液的透析袋中进行透析，每4h换一次透析液，透析完成后即得沙门膜孔蛋白ompc。

8、由于用原核系统表达出的ompc蛋白是属于包涵体蛋白。根据包涵体蛋白的特性进行了多次纯化条件的摸索以及透析复性条件的摸索。在纯化表达透析过程中进行了一下条件的探索，摸索得到上述条件。

9、本发明还提供上述方法得到的沙门膜孔蛋白ompc在制备检测沙门菌的试剂中的应用。优选的，所述试剂为elisa检测试剂。

10、本发明还提供所述沙门膜孔蛋白ompc在制备高免血清中的应用。

11、具体的，是将沙门膜孔蛋白ompc进行免疫接种动物，免疫操作为：第0天注射100ug纯化后的ompc蛋白以及等体积的完全弗氏佐剂；随后第5天，第10天，第15天以同样的方式接种100ug纯化后的ompc蛋白以及等体积的不完全弗氏佐剂。

12、上述应用的一个具体实施例是：将膜孔蛋白ompc作为elisa检测过程中的包被抗原，该抗原可以很好的检测高免血清中ompc蛋白的相对含量。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、本发明公开了沙门膜孔蛋白ompc及其在检测中的应用，本ompc蛋白通过原核表达系统大肠杆菌bl21(de3)进行表达，由于用原核系统表达出的ompc蛋白是属于包涵体蛋白。根据包涵体蛋白的特性进行了多次纯化条件的摸索以及透析复性条件的摸索；最后将获得的ompc蛋白作为elisa检测板的包被抗原。本发明中蛋白的制备方法简单，成本低，容易大批量制备，可应用于elisa检测方法中，应用前景好。

1.沙门膜孔蛋白ompc的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.权利要求1所述制备方法得到的沙门膜孔蛋白ompc在制备检测沙门菌的试剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为elisa检测试剂。

4.权利要求1所述沙门膜孔蛋白ompc在制备高免血清中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，是将沙门膜孔蛋白ompc进行免疫接种动物，免疫操作为：第0天注射100ug纯化后的ompc蛋白以及等体积的完全弗氏佐剂；随后第5天，第10天，第15天以同样的方式接种100ug纯化后的ompc蛋白以及等体积的不完全弗氏佐剂。