一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法及其应用

本发明涉及生物提取，具体涉及一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法及其应用。

背景技术：

1、堇叶碎米荠是一种超聚硒植物，具有较高的营养价值。硒蛋白和硒蛋白肽是含硒活性物质，具有抗氧化、提高人体免疫力，调节人体肠道菌群等功效。随着社会的快速发展，亚健康人群不断增多，人们对健康意识的提高，硒的功效也因此受到更多关注。目前，市场上对富硒功能性食品的需求越来越大，因此开发安全绿色高效的有机硒源具有较高的经济价值。

2、现有技术中，堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取一般采用热浸、酶解法，提取分离过程中耗时长，且硒蛋白肽得率低。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述不足，本发明的目的在于提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法及其应用，可提高堇叶碎米荠中硒蛋白肽的得率和硒代氨基酸含量。

2、为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

3、一方面，提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其包括以下步骤：

4、采用氢氧化钠溶液提取堇叶碎米荠中硒蛋白，醋酸调ph值使堇叶碎米荠中硒蛋白沉降；用碱性蛋白酶、复合酶分别酶解堇叶碎米荠硒蛋白，复合酶包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，得到堇叶碎米荠硒蛋白肽酶解液；用膜分离浓缩系统分离纯化浓缩堇叶碎米荠硒蛋白肽，得到堇叶碎米荠硒蛋白肽浓缩液；将堇叶碎米荠硒蛋白肽浓缩液干燥，得到堇叶碎米荠硒蛋白肽粉末。

5、进一步地，堇叶碎米荠粉与氢氧化钠溶液的料液比为1:10-20。

6、进一步地，提取温度为50-60℃，提取时间为1.5-2.5h。

7、进一步地，酶解的子步骤为：

8、离心液调ph＝4.0-5.0，静置沉降1-3h，离心，沉淀入提取罐中加纯水，沉淀与纯水的质量比为1:10-30，调ph＝8.0-10.0，加入碱性蛋白酶，40℃-60℃酶解1h-3h，再加入复合酶，40℃-60℃酶解1h-3h。

9、进一步地，中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为2:1；碱性蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活均为20万u/g。

10、进一步地，酶解液用离心机离心，得离心液2。

11、进一步地，用膜分离浓缩系统分离纯化浓缩离心液2的子步骤为：

12、离心液2入陶瓷膜中分离，收集透过液1，透过液1入超滤膜中分离浓缩，收集透过液2；透过液2入纳滤膜中分离浓缩至透过液2体积的一半，加入2-4倍透过液2体积纯水冲洗得浓缩液。

13、进一步地，超滤膜为10kd分子量中空纤维膜，膜孔径为1nm-10nm，膜压力为0.4mpa-0.6mpa；纳滤膜为150da分子量中空纤维膜，膜孔径为0.1nm-1nm，膜压力为0.8mpa-1.5mpa。

14、进一步地，堇叶碎米荠硒蛋白肽浓缩液采用喷雾干燥，进风温度为170-180℃，出风温度为60-80℃。

15、另一方面，提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法的应用，应用于堇叶碎米荠中有机硒组分的提取。

16、本发明的有益效果为：

17、(1)本发明采用碱性蛋白酶和复合酶(中性蛋白酶+木瓜蛋白酶)联合酶解堇叶碎米荠硒蛋白，酶解效率高、酶解条件可控，再进一步采用膜分离浓缩方式将大分子蛋白质、糖类和其它小分子物质分离出去，能有效提高硒蛋白肽的得率和相对分子量质量肽段(180-10000da)的相对百分比以及有机硒的含量，得到浓度更高、纯度更高的浓缩硒蛋白肽。

18、(2)本发明提取方法、高效，环保、操作简单，成本低，可工业化生产。

1.一种堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，堇叶碎米荠粉与氢氧化钠溶液的料液比为1:10-20。

3.根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，提取温度为50-60℃，提取时间为1.5-2.5h。

4.根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，酶解的子步骤为：

5.根据根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为2：1；碱性蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活均为20万u/g。

6.根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，用膜分离浓缩系统分离纯化浓缩堇叶碎米荠硒蛋白肽的子步骤为：

7.根据权利要求6所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，超滤膜为10kd分子量中空纤维膜，膜孔径为1nm-10nm，膜压力为0.4mpa-0.6mpa；纳滤膜为150da分子量中空纤维膜，膜孔径为0.1nm-1nm，膜压力为0.8mpa-1.5mpa。

8.根据权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法，其特征在于，堇叶碎米荠硒蛋白肽浓缩液采用喷雾干燥，进风温度为170-180℃，出风温度为60-80℃。

9.一种权利要求1-8任一所述的堇叶碎米荠中硒蛋白肽的提取方法的应用，其特征在于，应用于富硒堇叶碎米荠中有机硒组分的提取。