一种3-岩藻糖基乳糖的分批补料发酵生产方法与流程

1.一种3-岩藻糖基乳糖的分批补料发酵生产方法，其特征在于，所述生产方法采用保藏编号为cgmcc no.27189的大肠埃希氏菌进行3-岩藻糖基乳糖的发酵生产；所述生产方法以甘油为碳源，所述生产方法的补料策略为：当发酵培养基中甘油浓度<10g/l时向发酵培养基中流加甘油，使发酵培养基中甘油终浓度不低于20g/l；细胞密度指标od600nm达到20时，降低温度至诱导温度32℃，同时向发酵培养基中流加异丙基-β-d-硫代半乳糖吡喃糖苷和a-乳糖母液使发酵培养基中乳糖终浓度达到10g/l；当发酵培养基中乳糖浓度<5g/l时，向发酵培养基中流加a-乳糖使发酵培养基中乳糖浓度不低于10g/l；所述a-乳糖母液单独配制，升温至60℃加入氢氧化钠调节ph至10~11，然后115℃灭菌30min后降温至60℃保温，用于流加程序；监测发酵培养基的ph和溶氧量，流加ph调节剂控制发酵培养基的ph为6.6~6.8；发酵过程中控制通气量为1.0vvm~2.0vvm、搅拌桨转速200rpm~700rpm。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法使用的发酵培养基组成为：甘油 20g/l、kh2po4 5g/l、k2hpo4 5g/l、(nh4)2so4 4.0g/l、一水合柠檬酸 1.7g/l、mgso4·7h2o 1.4g/l、硫胺素 4.5mg/l 和体积百分比为1%的微量元素，用氢氧化钠调至 ph6.8；其中微量元素液组成为：feso4·7h2o 10g/l、znso4·7h2o 2.2g/l、cuso4·5h2o 1.0g/l、mnso4·h2o 0.38g/l、na2b4o7·10h2o 0.02g/l、(nh4)6mo7o24 0.1g/l 和 cacl2 2.0g/l，溶解于5 mol/l 盐酸。

3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法使用的碳源补料液为：甘油 800g/l；所述生产方法使用的a-乳糖母液的溶剂为水，所述a-乳糖母液中a-乳糖浓度为650g/l。

4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法的流加用ph调节剂为体积百分比为50%的氨水。

5.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法中，在发酵培养基降温至诱导温度32℃时，流加异丙基-β-d-硫代半乳糖吡喃糖苷使发酵培养基中异丙基-β-d-硫代半乳糖吡喃糖苷终浓度为0.2 mmol/l。

6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法的发酵罐中种子培养液接种量为3%。