一种植物类抑制肿瘤靶向多肽制剂及其制备方法与流程

本发明涉及肿瘤治疗术领域，更具体地，涉及一种植物类抑制肿瘤靶向多肽制剂及其制备方法。

背景技术：

1、近年来，植物对肿瘤的预防和抗癌作用是近年研究的热点之一。中医学中关于肿瘤的具体记载，散见于各种疾病当中，抗肿瘤的植物多是结合这些疾病的治疗用药所总结，主要包括清热解毒类、补气类等。均需经过中医辨证后，严格在医生指导下服用。

2、黄芪以其根入药，药用历史悠久。中国最早的《神农本草经》把黄芪列为“上品”。《药性歌诀》云：“黄芪入药，为强壮剂，具有益正气，壮脾胃，排脓止痛，活血医危的功效。对表虚自汗、气虚内伤、精神萎靡、四肢无力、脾虚泄泻、体虚多汗、气虚脱肛、子宫脱垂、浮肿及痈疽等疾病疗效显著”。《名医别录》、《本草纲目》等古药书均认为它有益气补虚的作用。黄芪是一味补益的中药，生用黄芪，有益气固表、利水消肿、脱毒、生肌的功效，蜜炙黄芪有补气、养血、益中功效。现代药理学研究表明黄芪含、活性多肽、皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素，可以提高人体的免疫能力，对抗肿瘤有一定的辅助功效。手术前后辩证使用黄芪，能增强机体免疫力，提高手术治愈率，提高患者生存质量。放疗、化疗期间用黄芪，可减轻放、化疗的毒副作用，提高放、化疗的疗效，增强病人对放、化疗的耐受力。

3、但是目前，现有技术中针对黄芪多肽的研究相对较少，且在肿瘤治疗领域的报道更为少见。医药工作者需要进行持续研发工作，找寻一种具有高效抗癌作用的黄芪多肽。

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的技术问题，为有效发掘抗肿瘤植物应用的潜力，本发明提供了本发明首次从黄芪根中分离和纯化得到2种具有靶向结合并抑制pd-l1的活性多肽，所述活性多肽具有广谱的抗肿瘤活性，能有效抑制肿瘤细胞增殖，且具备良好的生物学相容性，具备较大的应用前景。

2、具体而言，本发明首先是提供了一种植物类抑制肿瘤靶向多肽的制备方法，包括以下步骤：

3、1)备料：将黄芪根清洗干净后，切成碎块，常温风吹干备用；

4、2)物理粉碎：将步骤1)黄芪根碎块放入破壁机进行粉碎至细颗粒状；

5、3)将步骤2)得到的黄芪粉进行超临界co2萃取处理，萃取时间6-12h，得到脱脂黄芪粉；

6、4)将步骤3)得到的脱脂黄芪粉与水按照重量比1:10-20混合均匀，调节ph值为8.5-10.5，升温至50-70℃后，辅以超声微波处理，微波时间10-20min，过滤，收集过滤液；

7、5)复合酶解：将步骤4)的过滤液加入终浓度为20-50％的复合蛋白酶，持续搅拌酶解5-10h，并升温至95-100℃恒温10-15min灭酶，随后离心分离上清液得到黄芪酶解液；

8、6)过滤浓缩：向步骤5)黄芪酶解液采用超滤膜过滤，截留分子量在4000-5000da多肽分子；将过滤后的黄芪多肽真空浓缩至浓度为10-18°bé，制得黄芪多肽浓缩液；

9、7)黄芪多肽鉴定：取步骤6)黄芪多肽浓缩液进行测序处理；

10、8)黄芪多肽纯度鉴定：将黄芪多肽浓缩液转移至喷雾干燥机，进风温度90-100℃，出风温度70-80℃进行干燥至黄芪多肽干粉含水质量不大于5％，收集干粉，即制得黄芪多肽。

11、优选地，步骤1)中黄芪碎块大小为长宽高均为0.5～1.0cm的碎块。

12、优选地，步骤2)破壁条件为50000-100000r/min破壁5-30min。

13、优选地，步骤5)复合蛋白酶为中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的复配，二者用量比为(3-5):(2-9)。

14、优选地，步骤5)中的酶解条件为28-45℃的温度下持续搅拌酶解12-24h。

15、优选地，步骤5)进一步还包括将酶解液升温至90-100℃恒温10-30min灭酶。

16、优选地，步骤6)中的真空浓缩至浓度为14°bé。

17、优选地，步骤2)中进行ob itrap fus i on lumos质谱仪测序处理。

18、优选地，步骤8)中经鉴定得到的黄芪多肽的氨基酸序列依次为seq id no.1-2所示。

19、本发明的另一目的在于提供了一种植物类抑制肿瘤靶向多肽，其特征在于，所述多肽的的氨基酸序列依次为seq id no.1-2所示。

20、优选地，所述多肽具有靶向结合并抑制pd-l1。

21、进一步地，本发明还提供了一种抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂是以黄芪多肽为主要活性成分，所述黄芪多肽的氨基酸序列如seq id no.1-2任一一种或组合。

22、进一步地，本发明还提供了所述黄芪多肽在制备抗肿瘤制剂中的用途，其特征在于，所述黄芪多肽的氨基酸序列如seq id no.1-2任一一种或组合。

23、优选地，所述肿瘤包括但不限于乳腺癌、胰腺癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、食道癌、结肠癌、膀胱癌、肾癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌等。

24、进一步地，本发明还提供了所述黄芪多肽在制备pd-l1抑制剂中的用途，其特征在于，所述黄芪多肽的氨基酸序列如seq id no.1-2任一一种或组合。

25、本发明的优点如下：本发明首次从黄芪根中分离和纯化得到2种具有靶向结合并抑制pd-l1的活性多肽，所述活性多肽具有广谱的抗肿瘤活性，能有效抑制肿瘤细胞增殖，且具备良好的生物学相容性，具备较大的应用前景。

1.一种植物类抑制肿瘤靶向多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中黄芪碎块大小为长宽高均为0.5～1.0cm的碎块。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）破壁条件为50000-100000r/min破壁5-30min。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）复合蛋白酶为中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的复配，二者用量比为(3-5):(2-9)。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）中的酶解条件为28-45℃的温度下持续搅拌酶解12-24h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）进一步还包括将酶解液升温至90-100℃恒温10-30min灭酶。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6）中的真空浓缩至浓度为14° bé。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤8）中经鉴定得到的黄芪多肽的氨基酸序列依次为seq id no.1-2所示。

9.一种植物类抑制肿瘤靶向多肽，其特征在于，所述多肽的的氨基酸序列依次为seqid no.1-2所示。

10.一种抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂是以黄芪多肽为主要活性成分，所述黄芪多肽的氨基酸序列如seq id no.1-2任一一种或组合。

11.黄芪多肽在制备抗肿瘤制剂或制备pd-l1抑制剂的用途，其特征在于，所述黄芪多肽的氨基酸序列如seq id no.1-2任一一种或组合。