用于乳糖不耐受诊断或辅助诊断的生物标志物组合、试剂盒及应用的制作方法

本发明涉及乳糖不耐受，具体涉及一种用于乳糖不耐受诊断或辅助诊断的生物标志物组合、试剂盒及应用。

背景技术：

1、乳糖不耐受(lactose intolerance，li)是指因乳糖酶数量不足或活性低下引起乳糖吸收不良，继而引发一系列消化道系统症状。在正常生理条件下，乳糖在小肠中被小肠黏膜上皮细胞刷状缘分泌的乳糖酶(又称β-半乳糖苷酶)水解成为葡萄糖和半乳糖，随后被人体吸收。而乳糖不耐受的人群由于缺乏乳糖酶或其活性降低，乳糖不能被水解、吸收，最终在肠道细菌的酵解作用下，发酵成为短链脂肪酸及气体，从而增加肠内渗透压，引发腹泻、腹痛、腹胀等症状，临床上将其称为乳糖不耐受症。

2、据世界卫生组织统计，全球约70％的成年人受乳糖不耐受或乳糖吸收不良影响。这种不耐受现象与种族、年龄和遗传等因素密切相关。对于成年人而言，通过回避含乳糖的食品即可避免症状的出现，但对于以乳糖为主要甚至单一糖类来源的新生儿、婴幼儿，乳糖不耐受是值得关注的病症。乳糖不耐受在中国婴幼儿中发病率极高，可达46.9％～70.0％，其最常见的症状为腹泻，如若不引起重视可导致慢性腹泻、营养不良、贫血、骨质疏松等长期危害。

3、目前对乳糖不耐受的判断，除了通过临床症状判断之外，实验室的检测方法包括氢呼气实验、乳糖耐量实验、粪便还原糖及ph测定、尿半乳糖测定、空肠黏膜活检以及基因检测等。其中，呼气试验检测周期长，需要配备特殊仪器，对患者依从度要求较高；乳糖耐量实验检测周期长，需要多次采血，对患者依从度要求较高；粪便还原糖及ph测定为定性测试，判断误差大，而且需要样本煮沸操作，过程繁琐；尿半乳糖测定需要受试者配合排尿、摄入乳糖、再次排尿，对患者依从度要求较高，且试剂盒操作较复杂；空肠黏膜活检为侵入性检查，操作难度大，方法繁琐，通常不用于临床检查；基因检测多用于遗传学研究，未在临床广泛推广。因此，市场需要一种采样方便、测试步骤简单、测试时间短的乳糖不耐受检测方法及其产品，为乳糖不耐受的诊断提供依据。

4、相关技术中公开可同时检测乳糖和ph两个项目的检测试纸，以提高乳糖耐受检测的准确性，并可快速判断检测结果。但其准确度的提高有限，会出现相反结果，导致难以判断。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供一种用于乳糖不耐受诊断或辅助诊断的生物标志物组合、试剂盒及应用，以提高乳糖耐受检测的准确性、有效降低了假阳性的概率。

2、本发明在第一方面提出了用于检测粪便样本中乳糖的物质和用于检测粪便样本中乳糖酶的物质在制备用于诊断或辅助诊断乳糖不耐受的产品中的应用。

3、根据本发明的应用，采用构建标志物组合的方式替代单个生物标志物的传统乳糖不耐受的检测方式，可提高乳糖不耐受诊断准确率，联合检测粪便样本中乳糖和乳糖酶，并对这两种标志物的检测结果进行除法运算、组合评估，可消除样本采集量的差异导致的结果偏差，有效降低假阳性的概率。

4、可选地，通过样本检测单元检测待测者粪便样本中乳糖含量和乳糖酶含量，计算乳糖酶含量除以乳糖含量的比值，获得评估指数，当评估指数＞9.42时，则认为所述待测者不为或候选不为乳糖不耐受患者，当评估指数≤9.42时，则认为所述待测者为乳糖不耐受患者。

5、可选地，还包括记载有诊断方法的可读性载体，所述诊断方法为：通过样本检测单元检测待测者粪便样本中乳糖含量和乳糖酶含量，然后将检测值带入联合检测诊断预测模型，计算诊断模型预测值，当诊断模型预测值＞9.42时，则认为所述待测者不为或候选不为乳糖不耐受患者，当诊断模型预测值≤9.42时，则认为所述待测者为乳糖不耐受患者；

6、所述联合检测诊断预测模型的公式为：诊断模型预测值＝lct/lac；

7、式中，lct为待测者粪便样本中乳糖酶的含量，lac为待测者粪便样本中乳糖的含量。

8、可选地，通过样本检测试纸检测待测者粪便样本中乳糖反应的颜色和乳糖酶反应的颜色，判断乳糖反应的颜色和乳糖酶反应的颜色各自对应的含量等级，将乳糖反应的颜色的等级和乳糖酶反应的颜色的等级组合确定对应的评估指数区间，所述评估指数区间包括乳糖耐受等级的颜色、乳糖耐受不良等级的颜色和乳糖不耐受等级的颜色。

9、进一步，所述待测者粪便样本为新生儿或婴幼儿的粪便。

10、进一步，所述婴幼儿的月龄为0～12个月。

11、本发明在第二方面提出用于诊断或辅助诊断乳糖不耐受的试剂盒，所述试剂盒含有用于检测粪便样本中乳糖的物质和用于检测粪便样本中乳糖酶的物质。

12、根据本发明的试剂盒，其检测样本为粪便，采集方便，并且是对乳糖和乳糖酶进行检测，检测过程简单、时间短，操作便捷，适用于实验室批量检验；并且该试剂盒可提高乳糖不耐受诊断准确率，联合检测粪便样本中乳糖和乳糖酶，并对这两种标志物的检测结果进行除法运算、组合评估，可消除样本采集量的差异导致的结果偏差，有效降低假阳性的概率。

13、可选地，所述用于检测粪便样本中乳糖的物质包括用于检测粪便样本中乳糖含量的试剂和/或仪器；所述用于检测粪便样本中乳糖酶的物质包括用于检测粪便样本中乳糖酶含量的试剂和/或仪器。

14、具体地，所述仪器包括检测模块、数据运算模块、数据比较模块和结论输出模块；

15、所述检测模块用于检测粪便样本中乳糖含量和乳糖酶含量；

16、所述数据运算模块用于将检测值带入联合检测诊断预测模型，计算诊断模型预测值，所述联合检测诊断预测模型的公式为：诊断模型预测值＝lct/lac；式中，lct为待测者粪便样本中乳糖酶的含量，lac为待测者粪便样本中乳糖的含量；

17、所述数据比较模块用于将所述诊断模型预测值与阈值进行比较；所述阈值为9.42；

18、所述结论输出模块用于输出结论，当所述诊断模型预测值＞9.42时，则输出所述待测者不为或候选不为乳糖不耐受患者的结果，当所述诊断模型预测值≤9.42时，则输出所述待测者为乳糖不耐受患者的结果。

19、可选地，所述试剂盒包括用于检测粪便样本中乳糖的试纸、用于检测粪便样本中乳糖酶的试纸和复合比色卡。

20、可选地，所述试剂盒还包括样本处理液；所述样本处理液为生理盐水。

21、进一步，用于检测粪便样本中乳糖的试剂或试纸包括抗vc氧化酶、乳糖酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替吡啉、3’5二氯二羟苯磺酸、表面活性剂和缓冲液成分；用于检测粪便样本中乳糖酶的试剂或试纸包括5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷、二甲基甲酰胺和缓冲液成分。

22、可选地，还包括乳糖酶校准品和乳糖校准品。

23、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

1.用于检测粪便样本中乳糖的物质和用于检测粪便样本中乳糖酶的物质在制备用于诊断或辅助诊断乳糖不耐受的产品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过样本检测单元检测待测者粪便样本中乳糖含量和乳糖酶含量，计算乳糖酶含量除以乳糖含量的比值，获得评估指数，当评估指数＞9.42时，则认为所述待测者不为或候选不为乳糖不耐受患者，当评估指数≤9.42时，则认为所述待测者为乳糖不耐受患者。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括记载有诊断方法的可读性载体，所述诊断方法为：通过样本检测单元检测待测者粪便样本中乳糖含量和乳糖酶含量，然后将检测值带入联合检测诊断预测模型，计算诊断模型预测值，当诊断模型预测值＞9.42时，则认为所述待测者不为或候选不为乳糖不耐受患者，当诊断模型预测值≤9.42时，则认为所述待测者为乳糖不耐受患者；

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过样本检测试纸检测待测者粪便样本中乳糖反应的颜色和乳糖酶反应的颜色，判断乳糖反应的颜色和乳糖酶反应的颜色各自对应的含量等级，将乳糖反应的颜色的等级和乳糖酶反应的颜色的等级组合确定对应的评估指数区间，所述评估指数区间包括乳糖耐受等级的颜色、乳糖耐受不良等级的颜色和乳糖不耐受等级的颜色。

5.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述待测者粪便样本为新生儿或婴幼儿的粪便。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述婴幼儿的月龄为0～12个月。

7.用于诊断或辅助诊断乳糖不耐受的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有用于检测粪便样本中乳糖的物质和用于检测粪便样本中乳糖酶的物质。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述用于检测粪便样本中乳糖的物质包括用于检测粪便样本中乳糖含量的试剂和/或仪器；所述用于检测粪便样本中乳糖酶的物质包括用于检测粪便样本中乳糖酶含量的试剂和/或仪器。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述仪器包括检测模块、数据运算模块、数据比较模块和结论输出模块；

10.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测粪便样本中乳糖的试纸、用于检测粪便样本中乳糖酶的试纸和复合比色卡。

11.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样本处理液；所述样本处理液为生理盐水。

12.如权利要求8或10所述的试剂盒，其特征在于，用于检测粪便样本中乳糖的试剂或试纸包括抗vc氧化酶、乳糖酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替吡啉、3’5二氯二羟苯磺酸、表面活性剂和缓冲液成分；用于检测粪便样本中乳糖酶的试剂或试纸包括5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷、二甲基甲酰胺和缓冲液成分。

13.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括乳糖酶校准品和乳糖校准品。