一种鸽子羽毛和粪便DNA的快速提取液及其提取方法与应用与流程

本发明属于鸽子dna快速提取，涉及一种适用于鸽子羽毛和粪便dna的快速提取液及其提取方法与进行鸽子性别鉴定应用。

背景技术：

1、鸽子是典型的“一夫一妻”制的繁殖方式，如果性别比例不当，会严重影响产业化饲养管理和繁殖育种，产蛋率也会明显下降。因此，对鸽子进行准确的性别鉴定，在养鸽业具有举足轻重的地位。然而，鸽子是一种单态性鸟，无论是在幼鸟还是成鸟时期，其雌雄外貌形态和行为差别很小。相较于翻肛鉴别、腹腔镜检、粪便类固醇检测等方法，利用分子生物学方法对鸽子进行性别鉴定，具有准确性高、成本低等优点。

2、利用传统的核酸提取方法对鸽子羽毛和粪便dna进行提取，操作繁琐，耗费时间长，设备需求多，不能满足鸽子羽毛和粪便dna提取快速、简便的需求。因此，为了满足快速简便进行鸽子性别鉴定的需求，亟需一种能够快速提取鸽子羽毛和粪便dna，且对下游pcr检测无抑制的提取方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种适用于鸽子羽毛和粪便dna的快速提取液及其提取方法与应用，旨在解决鸽子羽毛和粪便dna提取繁琐、耗费时间长的问题。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

3、一种适用于鸽子羽毛和粪便dna的快速提取液，包含快速提取液a和快速提取液b。

4、所述快速提取液a包括100-150 mmol/l的氢氧化钠、0.1%-0.3%的十二烷基硫酸钠，快速提取液b包括10-30 mmol/l，ph 8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。

5、所述氢氧化钠溶液浓度优选为100-150 mmol/l，溶剂为去离子水，溶质为氢氧化钠。以100 mmol/l的脱氧胆酸钠的配制为例，准确称量0.4 g氢氧化钠溶解于100 ml去离子水中，待脱氧胆酸钠完全溶解后，加水定容至100 ml。其它浓度的氢氧化钠溶液的配制，等比例改变氢氧化钠的加入量即可。

6、所述十二烷基硫酸钠溶液质量百分比为0.1%-0.3%，溶剂为去离子水，溶质为十二烷基硫酸钠。以0.1%的十二烷基硫酸钠溶液配制为例，配制方法如下：准确称取0.1 g十二烷基硫酸钠，加入去离子水定容至100 ml。不同质量百分比的十二烷基硫酸钠溶液的配制，等比例改变十二烷基硫酸钠的加入量即可。

7、所述快速提取液a中100-150 mmol/l的氢氧化钠与0.1%-0.3%十二烷基硫酸钠浓度为快速提取液a中各组分终浓度。

8、所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液浓度优选为10-30 mmol/l。三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液溶剂为去离子水，溶质为三羟甲基氨基甲烷（tris）和盐酸（hcl）。以50 mmol/l的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液配制为例，加入2.4228 g的tris和0.7292 g hcl，将上述溶质溶解在200 ml去离子水中，通过加入氢氧化钠调节溶液ph值至8.0，加入去离子水将体积补足至1 l。其它浓度的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液的配制，等比例改变tris和hcl的加入量即可。

9、本发明的另一个目的是提供一种用快速提取液对鸽子羽毛和粪便dna进行快速提取的方法，包括以下步骤：

10、（1）取1-2根鸽子羽毛或约0.1 g粪便到1.5 ml离心管中，然后加入200 μl快速提取液a，震荡混匀，室温静置5 min；

11、（2）加入1 ml快速提取液b，震荡混匀。

12、本发明还提供一种快速提取液的应用，具体为使用快速提取液提取鸽子dna进行pcr检测，完成鸽子性别鉴定。

13、本发明提取鸽子羽毛和粪便dna的原理：本发明使用氢氧化钠和十二烷基硫酸钠裂解细胞、变性蛋白，使dna释放出来，并通过三羟甲基氨基甲烷盐酸盐为dna提供一个稳定存在的环境。本发明所述的快速裂解液通过上述反应，实现裂解羽毛和粪便细胞，提取鸽子dna的目的。

14、本发明还提供一种用鸽子羽毛和粪便dna快速提取液提取鸽子dna进行性别鉴定的应用。

15、本发明的有益效果表现在：利用氢氧化钠的碱性性质可以将细胞膜和蛋白质降解，释放核酸；十二烷基硫酸钠作为一种阴离子表面活性剂，能够使蛋白质变性，破坏细胞膜，从而释放dna；三羟甲基氨基甲烷盐酸盐作为生物缓冲液，为dna保存提供一个稳定的ph值环境。快速提取液既加强对鸽子羽毛和粪便的裂解作用，促进了鸽子羽毛和粪便dna的释放，又为dna提供了稳定保存的环境，而且可直接用于下游pcr检测。

1.一种dna快速提取液，其特征在于，包括快速提取液a和快速提取液b。

2.根据权利要求1所述的一种dna快速提取液，其特征在于，包含如下组分：

3.根据权利要求1或2所述的一种dna快速提取液，其特征在于，所述氢氧化钠浓度为100-150 mmol/l、十二烷基硫酸钠浓度为0.1%-0.3%，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐浓度为10-30 mmol/l。

4.根据权利要求1或2所述的dna快速提取液，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐ph值为8.0。

5.一种dna提取方法，其特征在于，利用权利要求1或2所述的dna提取液提取dna。

6.根据权利要求5所述的dna提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.根据权利要求5或6所述的dna提取方法，其特征在于，待提取样本为鸽子羽毛或粪便。

8.根据权利要求5或6所述的dna提取方法，其特征在于，所述鸽子羽毛为1-2根，所述粪便约为0.1 g。

9.根据权利要求5或6所述的dna提取方法，其特征在于，快速提取液a加入量为200 μl。

10.根据权利要求5或6所述的dna提取方法，其特征在于，快速提取液b加入量为1 ml。