用于体细胞重编程以产生诱导多能干细胞的方法与流程

1.一种从体细胞重编程产生ipsc的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1的方法，其中，所述经历met转化的ipsc前体细胞丢失原始体细胞的形态学特征，并呈现出以圆顶穹窿状致密细胞集落和任选地增加的核质比为特征的met形态。

3.根据权利要求1-2的方法，其中，所述经历met转化的ipsc前体细胞表达多能性标志物，tra-1-60和/或ssea3。

4.根据权利要求1-3的方法，其中步骤(c)包括，在重编程的约第7天至约第21天，收获重编程中间体，更优选在重编程的约第10天至约第18天，例如，在第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天、第17天、第18天，收获重编程中间体。

5.根据权利要求1-4的方法，其中，所述体细胞是来自成年个体的体细胞或细胞系。

6.根据权利要求1-5的方法，其中体细胞是人血液细胞，例如，人pbmc。

7.根据权利要求1-5的方法，其中体细胞是人成纤维细胞。

8.根据权利要求1-7的方法，其中，步骤(c)，所述3d悬浮培养为搅拌或旋转悬浮培养系统，例如，转瓶、轨道摇床或生物反应器。

9.根据权利要求1-8的方法，其中，步骤(c)还包括，在悬浮培养一段时间后，将形成的细胞球体，传代至少一代，优选至少2代、3代，以获得稳定的ips细胞群体。

10.根据权利要求1-9的方法，其中，所述重编程因子是重编程转录因子，且步骤(a)中，将一种或多种重编程因子或编码所述重编程因子的核酸引入所述体细胞，以增加所述重编程因子在所述体细胞中的表达或蛋白量。

11.根据权利要求1-10的方法，其中，步骤(a)包括，以整合型病毒或非整合型病毒、或以mrna、游离型质粒或蛋白质的形式，向体细胞递送所述重编程因子，

12.根据权利要求1-11的方法，其中，所述一种或多种重编程因子包括或由klf4，c-myc，oct3/4，sox2，nanog和lin28中的至少三种或至少四种组成；

13.根据权利要求1-12的方法，其中，步骤(c)包括，以30-100rpm的转速，悬浮培养所述重编程中间体，优选地，转速为大约70rpm。

14.根据权利要求1-13的方法，其中，步骤(c)中，所述3d培养采用ipsc维持培养基(优选地，stemscale psc悬浮培养基)进行。

15.一种用于维持或扩增3d重编程的ipsc的方法，包括：

16.根据权利要求15的方法，其中，所述方法还包括，在步骤(i)后以及步骤(ii)前的细胞传代步骤。

17.根据权利要求15-16的方法，其中，在所述ipsc球体的大小达到300-500um之间，进行细胞传代。

18.根据权利要求15-17的方法，其中，所述ipsc维持培养包括，每4-6天传代细胞一次，

19.根据权利要求15-18的方法，其中，所述细胞传代包括，自ipsc球体，产生单细胞或不超过200个细胞的细胞团块，并重接种；

20.一种用于生产下游细胞衍生产品的方法，所述方法包括：通过权利要求1-19任一项的方法，获得ipsc，和使用所述的ipsc生产下游细胞衍生产品。