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一种特异性检测间型球孢囊霉的靶标Rpb1基因及其应用

2025-07-07 16:20:01 769次浏览

技术特征:

1.一种特异性检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的靶标rpb1基因,其特征在于,所述靶标rpb1基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种以rpb1基因为特异性靶标检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp引物组合物,其特征在于,所述引物组合物包括:如seq id no.2所示的正向内引物fip,如seq id no.3所示的反向内引物bip,如seq id no.4所示的正向外引物f3,如seq idno.5所示的反向外引物b3,如seq id no.6所示的反向环引物lb。

3.一种权利要求2所述的以rpb1基因为特异性靶标检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp引物组合物在制备试剂盒中的应用。

4.一种用于检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包含权利要求2所述的lamp引物组合物。

5.根据权利要求4所述的用于检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含10×thermopol buffer、mgso4、dntps、甜菜碱、bst dna polymerase、羟基萘酚蓝。

6.一种权利要求2所述的lamp引物组合物、权利要求4~5任一项所述的lamp试剂盒在检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)中的应用,所述的检测为非疾病诊断目的的检测。

7.一种检测间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp方法,其特征在于,包括以下步骤:提取待检微生物dna,取dna溶液作为反应模板,以权利要求2所述的引物组合物进行lamp反应,然后观察扩增产物的颜色变化,若扩增产物呈天蓝色表示检测结果为阳性,则表示待检测生物中存在间型球孢囊霉(globisporangium intermedium);若扩增产物呈紫色表示检测结果为阴性,则表示待检测生物中不存在间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)。

8.根据权利要求6所述的间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp方法,其特征在于,所述lamp反应体系为:2.5μl 10×thermopol buffer,8mmol·l-1mgso4,1.2mmol·l-1dntps,内引物fip和bip各1.6μmol·l-1,外引物f3和b3各0.4μmol·l-1,0.8μmol·l-1环引物lb,0.8μmol·l-1甜菜碱,8u·μl-1bst dna polymerase,180mmol·l-1羟基萘酚蓝,2μl模板dna,灭菌水补至26μl。

9.根据权利要求6所述的间型球孢囊霉(globisporangiumintermedium)的lamp方法,其特征在于,所述lamp反应的程序为:63℃反应扩增63min。


技术总结
本发明公开了一种特异性检测间型球孢囊霉的靶标Rpb1基因及其应用,所述靶标Rpb1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明公开的特异性检测间型球孢囊霉(Globisporangium intermedium)的靶标Rpb1基因,基于该靶标基因设计的LAMP引物组合物可用于快速高效检测间型球孢囊霉(Globisporangium intermedium),检测方法具有特异性强、准确度高、灵敏度好、操作简单、可肉眼观察结果的优点,当DNA达到10pg·μL‑1时即可鉴定出间型球孢囊霉,实用性强。

技术研发人员:陈佳佳,于健,张超凡,彭金凤,孙亚亚,付丹阳,黄晓潇,李松,吴项乾,郑香容
受保护的技术使用者:江苏农林职业技术学院
技术研发日:
技术公布日:2024/11/21
文档序号 : 【 40071444 】

技术研发人员:陈佳佳,于健,张超凡,彭金凤,孙亚亚,付丹阳,黄晓潇,李松,吴项乾,郑香容
技术所有人:江苏农林职业技术学院

备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
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陈佳佳于健张超凡彭金凤孙亚亚付丹阳黄晓潇李松吴项乾郑香容江苏农林职业技术学院
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