仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法
技术特征:
1.仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:能与变异链球菌共聚的益生菌为嗜酸乳杆菌。
3.根据权利要求2所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:通过如下方法获取嗜酸乳杆菌外膜,具体包括:
4.根据权利要求3所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:在步骤s16中,收集到嗜酸乳杆菌外膜还需采用无菌水洗涤膜沉淀物,并通过400nm的多孔聚碳酸酯膜挤出,以获得纯化的嗜酸乳杆菌细胞膜。
5.根据权利要求2或4所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:在步骤二中,通过如下方法获取plga-nps溶液,具体包括:
6.根据权利要求5所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:步骤三中,通过如下方法获取变异链球菌膜表面蛋白组分,具体包括:
7.根据权利要求6所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:s33步骤中采用的洗涤缓冲液为丝氨酸蛋白酶抑制剂(pmsf)与tm缓冲液混合溶液,丝氨酸蛋白酶抑制剂与tm缓冲液比例为100:1。
8.根据权利要求6所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:在步骤s34~s36之间还包括冷冻研磨步骤,在变异链球菌悬浮液中加入玻璃珠,并在-50℃条件下冷冻研磨20min,放入离心力为3000xg的离心机中离心5min去除玻璃珠。
9.根据权利要求2或8所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:在步骤六中;静置之后,沉淀组分在缓冲液中洗涤2-3次后,进行裂解成肽段之后进行质谱定量检测。
10.根据权利要求9所述的仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,其特征在于:步骤六中得到的黏附因子,均于-80℃冰箱中保存。
技术总结
本发明涉及微生物资源获取技术领域,公开了仿生纳米颗粒对变异链球菌膜表面黏附因子的捕获方法,包括获取能与变异链球菌发生共聚的益生菌的外膜;制备200±20nm直径大小的LA@PLGA仿生纳米颗粒;获取变异链球菌膜表面蛋白组分溶液;通过LA@PLGA仿生纳米颗粒与变异链球菌膜表面蛋白组分溶液混合孵育,然后离心分离得到沉淀及上清液两组分,并通过差异蛋白组学定量分析得到黏附因子。采用本方案成功捕获了变异链球菌膜表面与益生菌发生共聚的特异黏附因子,通过本方法可以提取特异的黏附因子,对于因该黏附因子与牙齿病变疗效研究,起到关键作用。
技术研发人员:陈亮,杜岚
受保护的技术使用者:重庆医科大学附属口腔医院
技术研发日:
技术公布日:2024/11/18
技术研发人员:陈亮,杜岚
技术所有人:重庆医科大学附属口腔医院
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