基于多肽-发夹DNA偶联物构建的抗污染光电化学DNA传感器的制作方法

1.基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，所述抗污染光电化学dna传感器检测过程包含pda/tcpp/cof-v光电极制备、偶联物lzp-hdna制备、核酸探针pdna-agins2制备、抗污染dna传感器构建以及光电化学测试，其特征在于：所述pda/tcpp/cof-v光电极的制备包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述偶联物lzp-hdna的制备方法为将含有300μl40μm的lzp和300μl40μm的hdna溶液混合后置于摇床中，在37℃下保持震荡5min，最终获得浓度为20μm的lzp-hdna偶联物。

3.根据权利要求2所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述核酸探针pdna-agins2的制备开始前需要制备水溶性agins2量子点，所述水溶性agins2量子点在制备时先将25ml含有0.1mmmpa、0.4mmin(no3)3和0.1mmagno3的水溶液置于50ml三颈烧瓶中。

4.根据权利要求3所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述置于三颈烧瓶中的水溶液要在快速搅拌下将1.5ml0.2m的na2s溶液迅速加入，将溶液加热至100℃，回流保持2h，使agins2量子点生长充分，最后把获得的量子点4℃进行常温保存。

5.根据权利要求4所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述量子点经过酰胺偶联反应合成pdna-agins2核酸探针，所述核酸探针pdna-agins2反应合成时将150μlagins2量子点和100μl的10mmedc/nhs溶液混合，室温保持30min，以充分活化agins2量子点表面的羧基，然后将400μl30μm氨基修饰的pdna加入到上述溶液，室温反应2h，最后将所得溶液超滤纯化并用600μltris-hcl缓冲液稀释，置于4℃环境中备用。

6.根据权利要求5所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述抗污染dna传感器构建过程中将20μl20μm的lzp-hdna偶联物分散至pda/tcpp/cof-v光电极表面，在4℃湿润环境下孵育过夜，通过michael反应将lzp-hdna锚定到光电极表面，然后用tris-hcl缓冲液洗涤电极以除去未连接的偶联物，随后将电极与20μl含有10uλ-exo的不同浓度的tdna溶液在37℃下孵育1h，用tris-hcl缓冲液洗涤后，将电极与20μl20μm的pdna-agins2核酸探针在37℃下继续孵育1h，tris-hcl缓冲液清洗后，所得电极用于后续pec测试。

7.根据权利要求6所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述光电化学测试时以制备的传感电极为工作电极，以铂丝为对电极，以饱和ag/agcl电极为参比电极，测试缓冲液为磷酸盐缓冲溶液，以pbs溶液中的溶解氧作为电子受体。

8.根据权利要求7所述的基于多肽-发夹dna偶联物构建的抗污染光电化学dna传感器，其特征在于：所述抗污染光电化学dna传感器检测过程中所使用的仪器有透射电子显微镜、扫描电子显微镜、x射线光电子能谱仪、x射线衍射仪、傅里叶变换红外光谱仪、光电化学工作站、电化学工作站、接触角测量仪、激光共聚焦显微镜和紫外-可见漫反射光谱仪。