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一种基于RPA-CRISPR的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)特异性靶标、引物和检测体系及方法

2025-05-01 10:40:06 191次浏览

技术特征:

1.一种用于检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的rpa-crispr/cas12a组合物,其特征在于,包括基于毒力基因的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)特异性碱基序列、rpa引物d11-f/d11-r、crrna、crispr/cas12a蛋白和ssdna-fq探针;所述碱基序列如seq id no .1所示,所述rpa引物d11-f/d11-r的序列如seq id no.2~3所示,所述crrna的序列如seq id no .4所示,所述fq-ssdna的序列如seq id no .5所示。

2.根据权利要求1所述特异性碱基序列的获取方法,其特征在于,包括以下步骤:

3.根据权利要求1所述组合物在检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的产品中的应用。

4.一种快速检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的方法,其特征在于,包括以下步骤:

5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤1中采用煮沸法或试剂盒提取待测样品dna。

6.根据权利要求4或5所述的检测方法,其特征在于,步骤2所述核酸恒温扩增反应的反应体系中,引物d11-f/d11-r的终浓度为0.448 μm。

7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,步骤3所述检测体系中,cas12a的终浓度为80 nm,crrna的终浓度为80 nm,ssdna-fq的终浓度为200 nm。

8.一种用于检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的试剂盒,其特征在于,含有权利要求1所述rpa-crispr/cas12a组合物。


技术总结
本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)特异性毒力基因靶标、引物和检测体系及方法。本发明所述靶标序列、RPA引物和crRNA具有良好的特异性,所构建的检测方法对其它亚种无特异性识别反应,检测结果准确可靠。此外,本发明所述检测方法结合煮沸法或试剂盒提取样品DNA,在不进行菌体富集的前提下,对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)基因组DNA的检测灵敏度为10<supgt;‑4</supgt; ng/μL,菌液灵敏度为1.52 CFU/mL。对于椰汁、大米粉和糯米粉进行添标检测,样本检出限均达到10<supgt;0</supgt; CFU/mL,样本前处理简单,操作便捷,灵敏度高,可靠性高,适用于相关监管部门对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的现场快速检测。

技术研发人员:沈兴,谢宇,雷红涛,徐振林,刘艳,朱宇赫
受保护的技术使用者:华南农业大学
技术研发日:
技术公布日:2024/11/18
文档序号 : 【 40049310 】

技术研发人员:沈兴,谢宇,雷红涛,徐振林,刘艳,朱宇赫
技术所有人:华南农业大学

备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
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沈兴谢宇雷红涛徐振林刘艳朱宇赫华南农业大学
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