蜻蜓凤梨AfGF14i基因、克隆方法、表达载体及应用

1.一种蜻蜓凤梨afgf14i基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如序列表中seq idno.1所示。

2.一种蜻蜓凤梨afgf14i基因的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因的克隆方法，其特征在于，步骤(1)总rna的提取具体如下：

4.根据权利要求2所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因的克隆方法，其特征在于，步骤(2-2)中设计的全长cdna扩增引物包括afgf14i-f和afgf14i-r引物，序列分别如序列表中的seq idno.2、seq id no.3所示。

5.一种蜻蜓凤梨afgf14i基因表达载体，其特征在于：含有权利要求1所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因为目的基因的表达载体。

6.根据权利要求5所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因表达载体，其特征在于：是用权利要求1所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因连入到植物表达载体camv35s-yfp上，构建成在camv35s启动子下游含有蜻蜓凤梨afgf14i基因的高效表达载体。

7.根据权利要求6所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因表达载体，其特征在于：根据已测序的afgf14i基因序列，设计在5’端加上27bp含kpn i酶切位点的同源重组接头的上游引物p1和含xbal i酶切位点的同源重组接头的下游引物p2，以afgf14i基因测序验证正确的质粒为模板，pcr扩增全长，并利用kpn i和xba i限制性内切酶将camv35s-yfp载体线性化，采用clonexpresstmiione step cloning kit构建重组载体，经过菌液pcr及测序验证后获得afgf14i基因表达载体。

8.根据权利要求7所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因表达载体，其特征在于：所述上游引物p1和下游引物p2的序列如序列表中的seq id no.4、seq id no.5所示。

9.一种利用权利要求1所述的蜻蜓凤梨afgf14i基因编码蛋白的亚细胞定位方法，其特征在于，通过在烟草叶片上瞬时表达分析afgf14i基因编码蛋白的亚细胞定位，将构建好的带有afgf14i基因cds序列的表达载体camv35s-afgf14i-yfp转入农杆菌eha105后，注射本氏烟(nicotiana benthamiana)烟草叶片，利用激光共聚焦显微镜观察荧光信号分布情况，确定afgf14i蛋白的亚细胞定位，观察发现afgf14i蛋白分布于细胞膜。

10.权利要求1～8任何一项所述的蜻蜓凤梨afgf14i基在调控南芥植物开花方面的应用。