一种富含胎儿样肠干细胞的肠类器官获取及无生长因子培养方法
技术特征：
1.一种用于获取和/或培养胎儿样肠干细胞的培养基，其特征在于：包括基础培养基、血清替代物，抗生素、谷氨酸盐/酯、hepes缓冲液、前列腺素e2、chir-99021和2-丙基戊酸，其中所述前列腺素e2的浓度为3-7μg/ml，所述chir-99021的浓度为2-5μm，所述2-丙基戊酸的浓度为1-3mm，所述培养基中不含有生长因子egf、noggin和r-spondin。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述基础培养基为dmem/f12完全培养基。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述血清替代物为n2和b27。
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述抗生素为青霉素和链霉素。
5.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述谷氨酸盐/酯为glutamax，所述glutamax的浓度为2mm。
6.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述hepes缓冲液的浓度为1m。
7.前列腺素e2、chir-99021和2-丙基戊酸在制备培养基中的应用，所述培养基用于体外获取或培养胎儿样肠干细胞，所述体外获取为使肠上皮细胞转化为胎儿样肠干细胞；
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述肠上皮细胞来源于小肠。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述肠上皮细胞为小鼠肠上皮细胞。
10.一种体外获取胎儿样肠干细胞的方法，其特征在于：将包裹在基质胶中的肠隐窝置于权利要求1-6任一所述的培养基中进行培养。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述肠隐窝分离自小肠。
12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述培养是在无菌、5％co2和37℃条件下进行的。
13.一种胎儿样肠干细胞的培养方法，其特征在于：将包裹在基质胶中的胎儿样肠干细胞置于权利要求1-6任一所述的培养基中进行培养，所述胎儿样肠干细胞是通过权利要求9-12任一所述方法获取的。
14.根据权利要求13所述的培养方法，其特征在于：所述培养是在无菌、5％co2和37℃条件下进行的。
技术总结
本发明涉及一种富含胎儿样肠干细胞(fetal‑like intestinal stem cells)的肠类器官获取及无生长因子培养方法。该培养基由以下成分组成：基础培养基、血清替代物、双抗、谷氨酸盐/酯、HEPES缓冲液、前列腺素E2、CHIR‑99021和2‑丙基戊酸。本发明的培养基中不包含生长因子，从而解决了生长因子成本高、储存条件苛刻等问题。本发明的培养基能够将肠上皮细胞诱导转化为胎儿样肠干细胞，并且富含胎儿样肠干细胞的肠类器官能够在培养基中正常生长和扩增。本发明的培养基中的小分子化合物不会改变细胞的固有生物学特性，这为培养方法提供了重要的方法学优势。本发明有助于推动胎儿样肠干细胞培养系统的应用，这为肠类器官的基础研究和临床应用提供了重要的技术支持和理论基础。
技术研发人员：何伟奇,苏迎,查娟民
受保护的技术使用者：苏州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/11/14
技术研发人员：何伟奇,苏迎,查娟民
技术所有人：苏州大学
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