一种食品原料粉中乳脂球膜蛋白的测定方法与流程

1.一种食品原料粉中乳脂球膜蛋白的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）中所述碳酸氢铵溶液的浓度为45-55mmol/l，所述超声提取的功率为1000-2000w，时间为20-40min，所述二硫酥糖醇溶液的浓度为90-110mmol/l，所述恒温反应的温度为55-65℃，时间为0.5-1h；所述碘乙酰胺溶液的浓度为90-110mmol/l，所述避光恒温反应的温度为25-35℃，时间为20-40min，所述甲酸溶液的浓度为3-7wt%，所述胰蛋白酶溶液的浓度为0.5-1.5mg/ml，所述恒温水浴酶解的温度为35-40℃，时间为10-12h，所述微孔滤膜的孔径为。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（4）中混合标准工作溶液的制备方法如下：将混合标准液用0.2%甲酸-5%乙腈混合溶液稀释至10 μg/ml和1μg/ml的混合标准稀释液，然后分别移取1μg/ml的混合标准稀释液0 μl、2.5 μl、5μl、10 μl、25 μl以及10μg/ml的混合标准稀释液5μl、10 μl、25 μl、50 μl、100 μl，均加入50 μl混合内标工作液，用0.2%甲酸-5%乙腈定容至1 ml，配制成0、2.5、5、10、25、50、100、250、500、1000 ng/ml系列浓度的标准工作溶液。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述混合内标工作液的配制方法如下：用0.2%甲酸-5%乙腈混合溶液配置混合内标物，每一种内标物稀释至10μg/ml；所述混合内标物为同位素标记的xdh-vrh、同位素标记的muc1-ekh、同位素标记的adpn-drh、同位素标记的btn-trh和同位素标记的pas6/7-qrh，其中，同位素标记的xdh-vrh的肽链为：，同位素标记的muc1-ekh的肽链为，同位素标记的adpn-drh的肽链为，同位素标记的btn-trh的肽链为，同位素标记的pas6/7-qrh的肽链为。

5.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述混合标准液的配制方法如下：称取特异肽标准品，用0.2%甲酸-5%乙腈混合溶液配制成分别为500 μg/ml的混合标准液，所述特异肽标准品为xdh-vr、muc1-ek、adpn-dr、btn-tr和pas6/7-qr，所述xdh-vr的肽链为：vslsttgfyr，muc1-ek的肽链为：egttaewvk，adpn-dr的肽链为：dsvastitgvvdr，btn-tr的肽链为：tplplagppr，pas6/7-qr的肽链为：qfqfiqvagr。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述特征肽muc1-ek、xdh-vr、btn-tr、adpn-dr、pas6/7-qr的保留时间分别为5.74min、6.09min、6.07min、6.26min和6.32min。

7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，所述试样中特征肽的含量的计算方法公式如下，计算结果扣除空白值：

8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述食品原料粉中乳脂球膜蛋白的含量的计算公式如下：