一种在线同时表征蛋白质二硫键和序列信息的方法与流程

1.一种在线同时表征蛋白质二硫键和序列信息的方法，其特征在于，基于hcd模式下，通过在线衍生系统，将蛋白样品与还原试剂经部分还原反应后再进行分析。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法满足以下一个或一个以上的条件：

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤包：蛋白变性、置换缓冲溶液、酶解、进样、检测和数据分析中的一种或多种；优选地，所述蛋白变性中还包括烷基化。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶解包括单酶酶解或多酶酶解；优选地，所述单酶为胰蛋白酶，和/或，所述多酶酶解为双酶酶解；更优选地，所述双酶酶解为胰蛋白酶和v8蛋白酶，或，胰蛋白酶和糜蛋白酶。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原试剂的终浓度为1～100mm，优选为2.5～50mm，更优选为2.5～40mm，进一步更优选为20mm。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原试剂的反应时间为1～30分钟，优选为3～10分钟。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白变性使用蛋白变性试剂例如为尿素或盐酸胍，所述烷基化使用可使游离巯基的末端封闭的封闭试剂例如为碘乙酰胺、n-乙基马来酰亚胺或碘乙酸；

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述置换缓冲溶液使用tris缓冲液或nh4hco3缓冲液；优选地，所述置换缓冲液的工作浓度为10～200mm；更优选地，所述置换缓冲液的工作浓度为25～100mm；进一步更优选地，所述置换缓冲液工作浓度为50mm。

9.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述检测使用lc-esi-q exactive hf-xms进行；优选地，所述检测使用梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的a相和b相分别为0.05～0.2％甲酸和0.05～0.2％甲酸乙腈，

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱使用的a相和b相分别为0.1％甲酸和0.1％甲酸乙腈，