一种调控Th1/Th2免疫平衡的复合多糖及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种调控th1/th2免疫平衡的复合多糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、动物体内存在两种免疫细胞平衡状态，即th1/th2免疫细胞平衡，它们在体内对免疫过程互为补充，但又彼此具有相互抑制的作用，让细胞免疫与体液免疫处于一个平衡的状态。一般th1介导体内细胞免疫反应，它们直接攻击病原体或促进其他细胞攻击病原体，即使病原体进入被感染的细胞，它们依然会发起攻击。th2则主要介导体液免疫反应，th2细胞不会进入被感染的细胞，它们会促进其他免疫细胞产生抗体，如il-13和il31是其标志性抗体之一，由这些抗体来攻击外源物质。th1/th2失衡则会导致机体产生不同免疫疾病，如类风湿关节炎、多发性硬化症等疾病，而th2细胞处于强势时会导致过敏性疾病、哮喘、皮炎等。

2、蛋清中的主要蛋白质包括卵清蛋白、卵转铁球蛋白、类卵沾蛋白、卵沾蛋白、溶菌酶、球蛋白g2、球蛋白g3等。卵清蛋白(ovalbumin)是蛋清中的主要蛋白组分，是一种磷酸糖蛋白质，其含量占蛋清总蛋白质的54％-69％，是蛋清中最主要的蛋白质。由386个氨基酸残基组成，相对分子质量约为45000，等电点为4.5。

3、卵清蛋白有多种用途，如它属于一种能增强人体免疫力的成分，人体的体液免疫，细胞免疫都是由蛋白质构成，所以可以通过补充卵清蛋白来提升免疫功能；同时，卵清蛋白不仅能使皮肤保水能力增加，提高保湿效果，还能调整皮肤表层油脂成适当量，使皮肤中组织结合更为紧密；卵清蛋白具有丰富的营养价值和良好的功能特性，可以在食品加工中应用，如它具有较强的乳化作用，可以作为乳化剂应用于食品加工中；同时卵清蛋白还有良好的界面吸附能力，可形成凝胶应用于食品行业加工；由于卵清蛋白来源安全、具有优异的起泡性、亲水性、乳化性和易成凝胶的特点，还广泛应用于婴儿食品、肉加工业、面包和甜点制造业。最近卵清蛋白还广泛应用于药物和疫苗制剂方面的研究，如卵清蛋白脂质体经皮疫苗、纳米颗粒抗菌剂、纳米脂质载体、微球脉冲缓释系统、纳米颗粒鼻腔递送系统等。

4、尽管卵清蛋白具有非常广泛的应用，然而卵清蛋白是蛋清中主要过敏原之一，目前为减少其免疫应激反应，大多采用糖基化和酶解法进行修饰，获得低致敏性卵清蛋白。然而有一部分人在使用含有卵清蛋白及其修饰蛋白的食品、制剂后仍然容易发生免疫应激反应，表现为过敏现象。针对其过敏现象，目前大多数是利用化学药进行拮抗，包括氯雷他定、盐酸西替利嗪、炉甘石洗剂、氢化可的松乳膏等。但它们均有一定的副作用，如口干、头痛，偶见肝功能异常，严重的甚至会出现全身性过敏反应。

5、近年来，多个研究表明植物多糖(也包括食用菌多糖)对机体免疫具有较好的调节作用，因而逐渐被应用于临床上治疗或改善机体免疫状态。然而这种单一植物多糖在一般应用条件下的功效往往非常有限。

6、对此，专利cn101518556a公布了一种增强卵清蛋白免疫小鼠体液免疫和细胞免疫应答的多糖组合物，可以诱导免疫应答，增强小鼠免疫力。另外，专利cn109463742a公开了一种能够增强人体免疫的多醣体配方及其制备工艺，也可达到增强人体免疫力的效果。但目前而言，如何应对卵清蛋白作为增强免疫力佐剂所带来的免疫应激状态，如何应对其诱发的过敏现象，在多糖免疫调节领域仍有所缺乏。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种可调节th1/th2免疫平衡，预防和/或抑制卵清蛋白导致的免疫应激反应的复合多糖。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一方面，提供一种多糖组合物，包括原料药的多糖提取物，所述原料药包括姬松茸、海藻、甘草、黄精和金银花。

4、在本发明的一些实施方式中，按质量百分比计，所述原料药包括：姬松茸20％-40％、海藻10％-30％、甘草5％-25％、黄精5％-25％、金银花5％-20％。

5、在本发明的一些实施方式中，按质量百分比计，所述原料药包括：姬松茸30％-40％、海藻10％-20％、甘草10％-25％、黄精15％-25％、金银花5％-15％。

6、在本发明的一些实施方式中，按质量百分比计，所述原料药包括：姬松茸20％-40％、海藻10％-16％、甘草22％-25％、黄精20％-25％、金银花5％-20％。

7、在本发明的一些实施方式中，按质量百分比计，所述原料药包括：姬松茸20％-30％、海藻10％-16％、甘草22％-25％、黄精20％-22％、金银花5％-10％。

8、在本发明的一些实施方式中，所述海藻为褐藻(phaeophyta)、红藻(rhodophyta)、海带(laminaria japonica)、裙带菜(undaria pinnatifidasuringar)中的至少一种。

9、在本发明的一些实施方式中，所述甘草为乌拉尔甘草(glycyrrhiza uralensisfisch.)、胀果甘草(glycyrrhiza inflata batal.)、光果甘草(glycyrrhiza glabra l.)中的至少一种。

10、在本发明的一些实施方式中，所述多糖组合物的分子量为0.5–2432kda。

11、在本发明的一些实施方式中，所述多糖组合物的单糖组成包括甘露糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖醛酸。

12、在本发明的一些实施方式中，所述多糖组合物的单糖组成包括0.5～1.5％甘露糖、1～2％鼠李糖、0.2～0.6％半乳糖、75～85％葡萄糖、12～14％木糖、0.5～1.2％阿拉伯糖、1.5～2.5％岩藻糖、0.2～0.6％半乳糖醛酸。

13、在本发明的一些实施方式中，所述多糖组合物的结构是含三级螺旋的晶状和非晶状混合片层结构。

14、姬松茸(agaricus balzeimurill)又称巴西蘑菇，是一种药食两用的真菌，属担子菌亚门层菌纲伞菌目蘑菇(黑伞)科蘑菇(黑伞)属，含有丰富的蛋白质和多糖。研究表明，姬松茸多糖具有抗病毒、抗氧化和免疫调节等多方面的功效。

15、海藻中含有大量的海藻多糖，它是一种由多个相同或不相同的单糖基通过糖苷键相连而成的高分子化合物，褐藻多糖、岩藻多糖、红藻多糖等均属此列；海藻多糖具有较好的凝胶性、稳定性、成膜性，同时具有抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种生物活性。

16、甘草是一种有着悠久历史的中草药，在医药、食品和工业生产中被广泛应用，甘草中含有多糖、黄酮、皂苷类成分，其中甘草多糖是从其中提取出来的活性多糖，易溶于水，对感染引发的炎症等疾病表现出治疗活性，同时具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎症等作用。

17、黄精为百合科植物滇黄精(polygonatumkingianum)，黄精(p.sibiricum)，或多花黄精(p.cyrtomema)的干燥根茎；现代研究表明，黄精多糖是黄精中主要的活性成分之一，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎抗菌、调节血糖血脂、抗病毒、增强免疫力及改善记忆力等作用。

18、金银花为忍冬科植物忍冬(lonicera japonica thumb.)干燥花蕾或带初开的花，在神农本草经中被列为上品，其性寒，味甘，有清热解毒、凉散风热之功效，从其中提取的金银花多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、免疫调节、降血糖及降血脂等作用。

19、本发明发现将姬松茸、海藻、甘草、黄精和金银花按上述比例混合制备复合多糖可以调节th1/th2平衡，预防和/或抑制卵清蛋白导致的免疫应激反应。

20、本发明的第二方面，提供本发明第一方面所述多糖组合物的制备方法，包括以下步骤：将原料粉碎后混合，加水浸泡提取、收集滤液浓缩、醇沉，收集沉淀。

21、在本发明的一些实施方式中，所述原料粉碎后过20～100目。

22、在本发明的一些实施方式中，所述原料和水的料液比为1：10～20g/ml。

23、在本发明的一些实施方式中，所述浸泡的时间为20～40min。

24、在本发明的一些实施方式中，所述提取的条件为：温度70～90℃，时间2～4h。

25、在本发明的一些实施方式中，提取后还包括过滤；具体为使用200～400目滤布过滤。

26、在本发明的一些实施方式中，所述醇沉为加入3～5体积倍的无水乙醇静置10～14h。

27、本发明的第三方面，提供本发明第一方面所述的多糖组合物在以下任一项中的应用：

28、(1)制备调节th1/th2平衡的产品；

29、(2)制备预防和/或治疗th1/th2失衡相关疾病的产品；

30、(3)制备提高免疫力的产品中的应用。

31、在本发明的一些实施方式中，所述th1/th2失衡相关疾病包括过敏和/或过敏相关疾病。

32、在本发明的一些实施方式中，所述过敏相关疾病包括过敏性鼻炎、过敏性哮喘等。

33、在本发明的一些实施方式中，所述机体过敏包括但不限于卵清蛋白引起的机体过敏。

34、在本发明的一些实施方式中，所述产品还包括食品、药品、保健品上可接受的辅料。

35、本发明的第四方面，提供一种产品，所述产品包含本发明第一方面所述的多糖组合物。

36、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括食品、药品和保健品中的至少一种。

37、在本发明的一些实施方式中，所述产品的功能为调节th1/th2平衡或预防和/或治疗th1/th2失衡相关疾病和/或提高免疫力。

38、通过将上述多糖组合物，直接制备或者加入药学上可接受的辅料后制备，可制成任何药学上可接受的剂型。以口服制剂为例包括：胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂或口服液。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

39、本发明的第四方面，提供一种方法，所述方法包括向受试者施用本发明第一方面所述的组合物或本发明第三方面所述的产品；所述方法用于以下任一项：

40、(1)调节th1/th2平衡；

41、(2)预防和/或治疗th1/th2失衡相关疾病；

42、(3)提高免疫力。

43、在本发明的一些实施方式中，所述th1/th2失衡相关疾病包括过敏或过敏相关疾病。

44、在本发明的一些实施方式中，所述过敏相关疾病包括过敏性鼻炎、过敏性哮喘等。

45、在本发明的一些实施方式中，所述过敏包括但不限于卵清蛋白引起的机体过敏。

46、在本发明的一些实施方式中，所述组合物每天的合适剂量范围为1-500mg/kg体重；上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

47、在本发明的一些实施方式中，在对动物用药时，所述组合物的每日给药剂量为100～300mg/kg/d，和/或，给药时间为2～4周，和/或，给药方法包括但不限于灌胃、直接口服、注射。

48、“受试者”在本文中定义为包括动物，诸如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。

49、本发明的有益效果是：

50、本发明提供了一种采用药食同源植物和食用菌为原料制备而成的复合多糖，所述原料包括姬松茸、海藻、甘草、黄精和金银花；与当前治疗卵清蛋白引免疫应激的药物相比，本发明的复合多糖可长期食用且无明显的毒副作用。而且，本发明的复合多糖通过共同提取后获得对免疫调节具有效果的分子量段，相对单一多糖的免疫调节效果，具有明显的协同增效的益处。本发明的复合多糖可调节th1/th2免疫平衡，预防和/或抑制卵清蛋白导致的免疫应激反应，为卵清蛋白的广泛应用提供了有效支撑。