一种防治烟草角斑病的生防菌剂及其制备方法和应用

本发明涉及烟草病害防治方法领域，具体涉及一种防治烟草角斑病的生防菌剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、烟草角斑病病原菌为丁香假单胞菌烟草致病变种(pseudomonassyringaepv.tabaci)，属假单胞杆菌属。是各烟区普遍发生的细菌性叶斑病害之一，且常与野火病混合发生。除四川、山东省的个别烟区外，一般为害较轻。烟草细菌性角斑病多发生在生长后期，主要为害叶片、蒴果、萼片、茎部等。叶片染病，在叶片上产生多角形至不规则形黑褐色病斑，边缘明显，周围没有明显黄色晕圈。病斑颜色也有较大差异，黑褐色或边缘褐色而中央呈黄褐色或乳白色，病斑常出现多重轮纹。烟株下部的叶片病斑往往较多。在潮湿条件下，病斑上出现溢脓，形成胶膜，干燥时病斑破裂脱落，病斑较多的叶片，整张枯黄，失去收烤价值。

2、烟草角斑病菌可依附在种子上越冬，也可在残留于土壤中病残体上越冬，成为翌年的初侵染源。种植病苗是引起大田发病的主要原因之—。病菌可从伤口和自然孔口侵入。大田发病后，病菌主要借助风雨传播，引起再侵染，昆虫、人、畜的活动也可起到传播病菌的作用。在条件适宜的状况下，病菌的潜育期仅4天。南方烟区在5-6月，北方烟区在7-8月病害开始发生，大流行往往出现在暴风雨之后。病菌侵人需高湿，传播需要雨水冲溅，凡是形成叶片大面积充水造成水渍状，都利于病害迅速扩展，而在暴风雨后就出现这种情况，这种现象称为“风雨性充水”。白天气孔张开，叶片容易充水，高氮低钾的营养状况也能增加叶片的充水程度，并导致烟株抗病力下降，从而对病害发展产生重要影响。烟草种植密度过大，通风透光差，田间过于潮湿，若遇暴风雨天气，叶片间很易互相摩擦，造成大量伤口，有利于病菌的侵入和传播。过早或过迟打顶都不利于植株体内营养的正常利用，会加重病害程度。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供了一种防治烟草角斑病的生防菌剂及其制备方法和应用，旨在解决烟株上在暴风雨之后易生出烟草角斑病的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、第一方面、一种防治烟草角斑病的生防菌剂，所述生防菌剂由细黄链霉菌发酵液、粘着剑菌发酵液混合而成；

4、所述细黄链霉菌发酵液、粘着剑菌发酵液用量比为8～10:6～8；

5、所述细黄链霉菌发酵液的活性成分为细黄链霉菌168，保藏编号为cgmccno.15355；

6、粘着剑菌发酵液的活性成分为粘着剑菌sneb2006，保藏编号为cgmcc no.28087。

7、进一步地，所述生防菌剂中细黄链霉菌168的活菌数不少于1ⅹ108cfu/ml；粘着剑菌sneb2006的活菌数不少于5×108cfu/ml。

8、第二方面、一种防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，包括：

9、步骤1、分别制备细黄链霉菌发酵液和粘着剑菌发酵液；

10、步骤2、将细黄链霉菌发酵液、粘着剑菌发酵液按质量比为8～10:6～8均匀混合，获取生防菌剂。

11、进一步地，细黄链霉菌的发酵液制备包括如下步骤：

12、s1：将细黄链霉菌置于固体培养基中活化培养，培养条件为28℃、24h后接种于液体高氏培养基中获得种子液；

13、s2：将s1中制备得到的种子液按5％接种量接种于新的液体培养基中，于28℃、140r/min下培养48h，获得发酵液。

14、进一步地，s1和s2中，活化菌株所用的培养基为高氏培养基。

15、进一步地，粘着剑菌的发酵液制备包括如下步骤：

16、s1：将粘着剑菌接种于固体培养基中活化培养，培养条件为32℃，24h后接种于液体培养基中获得种子液；

17、s2：将s1中制备得到的种子液按照接种量10％接种于新的液体培养基中，于32℃、150r/min下培养48h，获得发酵液。

18、进一步地，s1和s2中，活化菌株所用的培养基为na培养基。

19、第三方面、生防菌剂的应用，其特征在于，生防菌剂是用于放置烟草角斑病，且所述烟草角斑病是由丁香假单胞菌烟草致病变种侵染发生的，在使用时，移栽后到成熟期均可施用，发病前和发病初期使用效果最佳，每次用量100ml/亩。

20、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

21、1、本发明制备得到的生防菌剂能够抑制丁香假单胞菌烟草致病变种的生长，为防治烟草角斑病提供了技术支撑和理论依据；

22、2、本发明制备得到的生防菌剂不仅能够防止丁香假单胞菌烟草致病变种引起的烟草角斑病，还能诱导烟草产生抗病性，增强对烟草角斑病的防治作用。两种菌能够提高彼此对丁香假单胞菌烟草致病变种的抑菌效果。

23、3、本发明制备得到的生防菌剂的有效成分为细黄链霉菌168、粘着剑菌sneb2006，目前并没有发现以上菌株能用于烟草角斑病的防治中，而本发明发现了其在烟草角斑病防治中的新用途。

24、所述生防菌剂由细黄链霉菌、粘着剑菌的发酵液混合而成，所述细黄链霉菌发酵液的活性成分为细黄链霉菌168，保藏编号为cgmcc no.15355；粘着剑菌发酵液的活性成分为粘着剑菌sneb2006，保藏编号为cgmcc no.28087。该生防菌剂能够抑制丁香假单胞菌烟草致病变种的生长，为丁香假单胞菌烟草致病变种侵染产生的烟草角斑病的防治提供了技术支撑和理论依据。

1.一种防治烟草角斑病的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂由细黄链霉菌发酵液、粘着剑菌发酵液混合而成；

2.根据权利要求1所述的防治烟草角斑病的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂中细黄链霉菌168的活菌数不少于1ⅹ108cfu/ml；粘着剑菌sneb2006的活菌数不少于5×108cfu/ml。

3.一种如权利要求1所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括：

4.根据权利要求3所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，细黄链霉菌的发酵液制备包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，s1和s2中，活化菌株所用的培养基为高氏培养基。

6.根据权利要求3所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，粘着剑菌的发酵液制备包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，s1和s2中，活化菌株所用的培养基为na培养基。

8.一种权利要求1所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的应用，其特征在于，生防菌剂是用于防治烟草角斑病，且所述烟草角斑病是由丁香假单胞菌烟草致病变种侵染发生的。

9.根据权利要求8所述的防治烟草角斑病的生防菌剂的应用，其特征在于，移栽后到成熟期均可施用，发病前和发病初期使用效果最佳，每次用量100ml/亩。