一种检测农药残留的微针贴片及其制备方法和应用方法

本发明涉及农药残留检测，具体涉及一种检测农药残留的微针贴片及其制备方法和应用方法。

背景技术：

1、农药残留普遍存在于各种农产品中，包括茶叶、水果和蔬菜，并已成为世界上最广泛讨论的问题之一有些农药残留，特别是内源性农药，很难清除，可引起癌症、激素紊乱、哮喘、过敏、过敏和其他疾病因此，开发可靠的检测技术来监测农产品中农药残留水平至关重要。传统的方法，如气相色谱法和高效液相色谱法，往往需要耗时的样品处理，并且很难检测到原处的农药残留针对上述问题，已经报道了多种检测方法，包括电化学方法、表面增强拉曼光谱和比色法。侧向免疫层析法具有预处理简单、灵敏度高、反应速度快、特异性强等优点，是一种很有前途的农药残留检测方法。

2、一般有机磷农药前处理常用的技术：液液萃取、固相萃取技术、quechers方法，这些检测方法存在耗时长，抗干扰性差，操作繁琐，有机溶剂用量大等问题。酶联免疫法和胶体金试纸条的前处理方法虽然操作比仪器检测方法要简单，但前处理方式会用到匀浆或者切碎等，这样的前处理方式会增加基质效应干扰，并且只能检测农产品表面的农药残留，而不能检测农产品内部的农药残留。

技术实现思路

1、针对现有技术不足，本发明提出了一种检测农药残留的微针贴片及其制备方法和应用方法，可以同时以方便和微创的方式检测农产品表面和内部的农药残留。

2、为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：

3、第一方面，本发明提出了一种检测农药残留的微针贴片的制备方法，包括以下步骤：

4、s1：将聚乙二醇二丙烯酸酯、三乙胺和丙烯酰氯以99：0.5：0.5的质量比混合后得到混合溶液；

5、s2：将所述混合溶液注入到硅胶微针模具中，真空放置后利用紫外线照射该混合溶液，得到pegda贴片；

6、s3：将所述pegda贴片浸入浓度为50mmol/l表面修饰的多壁碳纳米管悬浮液中进行超声浸泡，室温放置后揭起上层透明膜，得到微针贴片。

7、进一步地，步骤s2中紫外线的照射条件为：照射强度为8-12mw/cm2，例如可以是8、9、10、11、12mw/cm2；波长为365nm，照射时间为40-50min，例如可以是40、41、42、45、47、50min；

8、步骤s2中真空放置的时间为12-18min，例如可以是12、14、15、18min。

9、进一步地，步骤s3中表面修饰的多壁碳纳米管包括羟基修饰多壁碳纳米管、羧基化多壁碳纳米管和氨基化多壁碳纳米管，优选为羟基修饰多壁碳纳米管。

10、进一步地，步骤s3中超声浸泡的时间为25-35min，例如可以是25、27、30、32、35min。

11、进一步地，步骤s3中的室温放置的时间为10-15h，例如可以是10、11、12、13、15h。

12、第二方面，本发明提出了一种采用上述方法制备的检测农药残留的微针贴片。

13、第三方面，本发明提出了所述的方法制备的检测农药残留的微针贴片在检测农产品中毒死蜱和/或甲基对硫磷的应用。

14、第四方面，本发明提出了一种检测农药残留的微针贴片的应用方法，所述应用方法包括：

15、将按照上述方法制备的微针贴片按压在待测物的不同部位；

16、按压后用pbs缓冲液浸泡微针贴片，得到洗脱液；

17、吸取洗脱液与金标混合抗体混匀，混匀静置后将液体转移至胶体金试纸条的样品垫上，通过胶体金读卡仪读取检测结果。

18、进一步地，所述pbs缓冲液的浓度为0.02mol/l，ph为7.4。

19、进一步地，微针贴片每次按压后停顿6-12s。

20、进一步地，所述胶体金试纸条按以下步骤制备：

21、制备胶体金：将质量分数为1%的氯金酸溶液加热至沸腾后再加入质量分数为1%的柠檬酸三钠溶液，继续加热直至溶液颜色趋于稳定后，得到胶体金溶液；

22、制备胶体金试纸条：将毒死蜱半抗原-牛血清蛋白偶联物用pbs缓冲液稀释至浓度为0.3mg/ml，喷于nc膜上，为t1线；在t1检测线上5mm处喷涂甲基对硫磷半抗原-牛血清蛋白偶联物，用pbs缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，为t2线；在t2线上5mm处喷涂羊抗鼠二抗，为c线；

23、组装胶体金试纸条：把nc膜、样品垫、吸水垫贴在pvc底板上，使样品垫与nc膜在长度方向上重合0.3cm，nc膜与吸水垫在长度方向上重合0.3cm，然后用切条机切割成宽度为3mm的试纸条，得到胶体金试纸条。

24、进一步地，所述金标混合抗体按以下步骤制备：

25、向胶体金溶液中加入9μl/ml毒死蜱和甲基对硫磷抗体，37℃摇床振荡30min,加入浓度为10%peg-20000振荡10min，再加入质量体积比为5%bsa，振荡10min；

26、反应后,放入高速冷冻离心机以12000r/min,离心5min，弃上清液,下层沉淀用100μl/ml重悬液溶解,得到金标混合抗体。

27、本发明提供的一种检测农药残留的微针贴片及其制备方法和应用方法，与现有技术相比优点在于：

28、本发明提出的微针贴片由经表面修改的多壁碳纳米管、聚乙二醇二丙烯酸酯、三乙胺和丙烯酰氯制备而成，其中，pegda具有无毒、生物相容性好、免疫原性低、使用方便等优点，在紫外线照射下，pegda分子链末端的丙烯酸酯双键断裂，并与其他pegda分子结合形成交联点和网络，pegda分子之间形成稳定的化学键，从而形成一个整体的水凝胶结构，多壁碳纳米管的加入可以提高吸附率、降低基质效应的干扰。本发明制成的微针贴片具有出色的膨胀能力，能够快速有效地吸收农产品中的农药残留，将微针贴片按压农产品表面，通过针尖进入蔬菜细胞内部来收集农药残留，再通过洗脱流程得到洗脱液后用胶体金试纸条进行检测，可以以最小的侵入方式刺穿植物，检测内部农药，适用于真实样品的现场采样和检测，并防止样品在检测过程中被破坏。

29、本发明通过在mwnts的表面进行表面处理，可以改善mwnts在有机溶剂或水溶剂中的分散性差的问题，以提高其在溶剂中的分散性。

1.一种检测农药残留的微针贴片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测农药残留的微针贴片的制备方法，其特征在于，步骤s2中紫外线的照射条件为：照射强度为8-12mw/cm2，波长为365nm，照射时间为40-50min；

3.根据权利要求1所述的检测农药残留的微针贴片的制备方法，其特征在于，步骤s3中表面修饰的多壁碳纳米管包括羟基修饰多壁碳纳米管、羧基化多壁碳纳米管和氨基化多壁碳纳米管。

4.根据权利要求1所述的检测农药残留的微针贴片的制备方法，其特征在于，步骤s3中超声浸泡的时间为25-35min。

5.根据权利要求1所述的检测农药残留的微针贴片的制备方法，其特征在于，步骤s3中的室温放置的时间为10-15h。

6.一种检测农药残留的微针贴片，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述的方法制备。

7.按照权利要求1-5任一项所述的方法制备的检测农药残留的微针贴片在检测农产品中毒死蜱和/或甲基对硫磷的应用。

8.一种检测农药残留的微针贴片的应用方法，其特征在于，所述应用方法包括：

9.根据权利要求8所述的检测农药残留的微针贴片的应用方法，其特征在于，

10.根据权利要求8所述的检测农药残留的微针贴片的应用方法，其特征在于，微针贴片每次按压后停顿6-12s。