搭载肽的载体系统及其用途的制作方法

背景技术：

1、已开发出客制化癌症疫苗，在动物研究及早期临床试验中显示出令人鼓舞的结果。然而，这些研究与试验显示，在完全实现客制化疫苗潜力之前，需要解决几个关键挑战。例如，强力抗癌效果所需的针对多种抗癌肽目标对t细胞的刺激是一项艰巨的任务，需要新的疫苗递送技术。当前的临床试验方案包括多达10种加强免疫接种，以引发可观察到的细胞免疫(参阅sahin等人，nature 547:222-226；keskin等人，nature 565:234-239；hilf等人，nature 565:240-245；以及ott等人，nature 547:217-221)，造成治疗时间延长且治疗效果受损。

2、已经测试合成的纳米载体作为肽抗原的递送载剂。认为此类纳米载体在施用后将肽从恶劣的细胞外环境中屏蔽并促进其被细胞摄取，进而导致效力增强。此外，已经将免疫佐剂掺入纳米载体中以同步递送免疫增强讯号与肽，为引发免疫反应的理想选择(参阅crouse,j.等人，nature rev.immunol.15:231-42)。然而，这种方法需要复杂的化学反应或使用非生物兼容性材料(参阅kuai，r.等人，nature materials 16:489-496；li,a.w.等人，nature materials 17:528-534；luo,m.等人，nature nanotechnol.12:648-654；以及liu,h.等人，nature 507:519-522)，引起后勤及安全性方面的考虑。

3、需要开发一种载体系统，其中具有各种物理化学特征的肽可容易地与纳米载体结合而无需采用费力的化学反应。这种方法将有助于多肽的配制及递送，进而扩大基于肽的疗法的研究及临床应用。特别是，有效的多抗原疫苗开发需要一种在不损害其免疫原性的情况下递送各种肽抗原的策略。载体系统技术对于有效的新抗原疫苗接种相当重要，亦可用于传染病管理及免疫耐受诱导领域。

技术实现思路

1、为了如上所述有效地递送目标肽，提供一种载体系统，包含纳米载体以及与所述纳米载体非共价结合的肽。所述肽由与所述目标肽的n端融合的转接子肽序列组成。所述纳米载体具有可为疏水性或亲水性的核心。所述纳米载体还具有表面，所述表面可具有净负电荷、净正电荷或一个或多个官能基团。所述转接子肽序列被设计为与所述疏水性核心、所述亲水性核心、所述具有净负电荷的表面、所述具有净正电荷的表面或所述带有一个或多个官能基团的表面非共价结合。

2、还提供一种改善肽抗原的免疫原性的方法。所述方法包括以下步骤：将所述肽抗原融合至转接子肽序列以形成免疫肽，并使所述免疫肽与纳米载体接触，进而使所述免疫肽稳定地与所述纳米载体非共价结合。所述目标肽为第一类mhc限制性抗原决定位或第二类mhc限制性抗原决定位，所述纳米载体具有亲水性核心，以及所述转接子肽序列包含二个或更多个选自d、e、r、k及h的亲水性氨基酸。

3、还公开一种用于治疗受试者的病症的免疫方法。通过将目标肽融合至转接子肽序列上以形成免疫肽，使所述免疫肽与纳米载体接触，进而使所述免疫肽与所述纳米载体稳定地非共价结合以形成载体系统，并将所述载体系统施用于所述受试者，进而提高对所述目标肽的免疫反应。所述目标肽为第一类mhc限制性抗原决定位或一第二类mhc限制性抗原决定位，且所述方法可用于治疗患有癌症、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、自体免疫，或对生物制剂具有不良免疫反应的受试者。

4、一个或多个实施例的细节于以下的描述及实施例中阐述。根据详细描述、图式，以及所附申请专利范围，其他特征、目的，以及优点将变得显而易见。

1.一种载体系统，包含纳米载体以及与所述纳米载体非共价结合的肽，所述肽包含与目标肽的n端融合的转接子肽序列，所述纳米载体具有核心以及表面，其中所述核心为疏水性的或亲水性的，所述表面具有净负电荷、具有净正电荷或带有一个或多个官能基团，且所述转接子肽序列有助于所述肽与所述纳米载体核心或表面的非共价结合。

2.根据权利要求1所述的载体系统，其中所述转接子肽序列包含二个或更多个选自d、e、r、k及h的亲水性氨基酸，或者所述转接子肽序列包含二个或更多个选自a、v、i、l、p、f、w及m的疏水性氨基酸。

3.根据权利要求2所述的载体系统，其中所述核心为亲水性的，且所述转接子肽序列为dn、en、(de)n、(dx)n或(ex)n，其中n为2至20的整数，且x为任何氨基酸。

4.根据权利要求3所述的载体系统，进一步包含融合在所述目标肽以及所述转接子肽序列之间的间隔区片段，其中所述间隔区包含二个或更多个选自g、a、s及p的氨基酸残基。

5.根据权利要求4所述的载体系统，其中所述间隔区片段为gn，其中n为1至15的整数。

6.根据权利要求5所述的载体系统，其中所述转接子肽序列为ddd(seq id no:8)或dddd(seq id no:9)，所述间隔区片段为ggg(seq id no:10)，且所述目标肽融合至所述间隔区片段的c端。

7.根据权利要求6所述的载体系统，其中所述目标肽为第一类mhc限制性抗原决定位或第二类mhc限制性抗原决定位。

8.如权利要求7所述的载体系统，进一步包括免疫反应刺激物，是选自干扰素基因(sting)激动剂、cpg-odn、r848及poly(i:c)的刺激物。

9.根据权利要求7所述的载体系统，进一步包含免疫反应抑制剂，是选自雷帕霉素、阿司匹林、维生素d、类固醇及n-乙酰胱氨酸。

10.根据权利要求8所述的载体系统，其中所述纳米载体为中空的聚合物纳米颗粒。

11.根据权利要求9所述的载体系统，其中所述纳米载体为中空的聚合物纳米颗粒。

12.一种改善肽抗原的免疫原性的方法，所述方法包括将所述肽抗原融合至转接子肽序列以形成免疫肽，并使所述免疫肽与纳米载体接触，使所述免疫肽稳定地与所述纳米载体非共价结合，其中所述目标肽为第一类mhc限制性抗原决定位或第二类mhc限制性抗原决定位，所述纳米载体具有亲水性核心，以及所述转接子肽序列包含二个或更多个选自d、e、r、k及h的亲水性氨基酸。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述转接子肽序列为dn、en、(de)n、(dx)n或(ex)n，其中n为2至20的整数，且x为任何氨基酸。

14.根据权利要求13所述的方法，进一步包含在所述肽抗原以及所述转接子肽序列之间融合间隔区片段，其中所述间隔区包含二个或更多个选自g、a、s及p的氨基酸残基。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述间隔区片段为gn，其中n为1至15的整数。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述转接子肽序列为ddd(seq id no:8)或dddd(seq id no:9)，所述间隔区片段为ggg(seq id no:10)，且所述肽抗原融合至所述间隔区片段的c端。

17.一种用于治疗受试者的病症的免疫方法，所述方法包括将目标肽融合至转接子肽序列上以形成免疫肽，使所述免疫肽与纳米载体接触，进而使所述免疫肽与所述纳米载体稳定地非共价结合以形成载体系统，并将所述载体系统施用于所述受试者，进而提高对所述目标肽的免疫反应，其中所述目标肽为第一类mhc限制性抗原决定位或第二类mhc限制性抗原决定位，且所述病症为癌症、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、自体免疫或对生物制剂的不良免疫反应。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述免疫肽进一步包含间隔区片段，所述间隔区片段融合在所述转接子肽序列的c端及所述目标肽的n端之间。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述转接子肽序列为ddd(seq id no:8)或dddd(seq id no:9)，所述间隔区片段为ggg(seq id no:10)。

20.根据权利要求17所述的方法，进一步包括将所述纳米载体并入选自干扰素基因(sting)激动剂、cpg-odn、r848及poly(i:c)的刺激物的免疫反应刺激物中，其中所述目标肽为癌症抗原、病毒抗原、细菌抗原，或寄生虫抗原。

21.根据权利要求17所述的方法，进一步包括将所述纳米载体并入选自雷帕霉素、阿司匹林、维生素d、类固醇及n-乙酰胱氨酸的免疫反应抑制剂，其中所述目标肽为自体抗原，且施用所述载体系统诱导对所述自体抗原的耐受性。

22.根据权利要求20所述的方法，其中所述纳米载体为中空的聚合物纳米颗粒。

23.根据权利要求21所述的方法，其中所述纳米载体为中空的聚合物纳米颗粒。