表达抗间皮素CAR的细胞的制作方法

1.一种工程化的先天性淋巴样细胞，其包含对间皮素具有特异性的异源靶向构建体。

2.如权利要求1所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述淋巴样细胞是自然杀伤(nk)细胞或γδt细胞。

3.如权利要求2所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述γδt细胞是vd1+γδ细胞。

4.如权利要求1至3中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述异源靶向构建体是嵌合抗原受体(car)。

5.如权利要求4所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述car是全长car或非信号传导car。

6.如权利要求4或权利要求5所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述car是装甲car。

7.一种药物组合物，其包含如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞，与一种或多种药学或生理学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂组合。

8.一种使用如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞或如权利要求7所述的药物组合物治疗有需要的患者的方法。

9.一种如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞或如权利要求7所述的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的病状。

10.如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞或如权利要求7所述的药物组合物，其用于疗法中。

11.一种制备如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞的方法。

12.一种分离的细胞群，所述群包含多种如权利要求1至6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞。

13.如权利要求1-6中任一项所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述细胞表达：(a)il-15r-β或(b)(i)拴系至il-15或其变体的il-15r-α和(ii)il-15r-β。

14.如权利要求13所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述细胞表达il-15r-β。

15.如权利要求13所述的工程化的先天性淋巴样细胞，其中所述细胞表达(i)拴系至il-15或其变体的il-15r-α和(ii)il-15r-β。

16.一种包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述car包含特异性结合人间皮素的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含可变重链(vh)结构域和可变轻链(vl)结构域，其中所述vh包含vh-互补决定区3(cdr3)，所述vh-互补决定区3包含seq id no:3所示的氨基酸序列。

17.如权利要求16所述的多核苷酸，其中所述car还包含vh-cdr2，所述vh-cdr2包含seqid no:2所示的氨基酸序列。

18.如权利要求16或17所述的多核苷酸，其中所述car还包含vh-cdr3，所述vh-cdr3包含seq id no:3所示的氨基酸序列。

19.如权利要求16至18中任一项所述的多核苷酸，其中所述car还包含vl-cdr1，所述vl-cdr1包含seq id no:4所示的氨基酸序列。

20.如权利要求16至19中任一项所述的多核苷酸，其中所述car还包含vl-cdr2，所述vl-cdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列。

21.如权利要求16至20中任一项所述的多核苷酸，其中所述car还包含vl-cdr3，所述vl-cdr3包含seq id no:6所示的氨基酸序列。

22.如权利要求16至21中任一项所述的多核苷酸，其中所述car包含：vh-cdr1，其包含seq id no:1所示的氨基酸序列；vh-cdr2，其包含seq id no:2所示的氨基酸序列；vh-cdr3，其包含seq id no:3所示的氨基酸序列；vl-cdr1，其包含seq id no:4所示的氨基酸序列；vl-cdr2，其包含seq id no:5所示的氨基酸序列；以及vl-cdr3，其包含seq id no:6所示的氨基酸序列。

23.如权利要求16至22中任一项所述的多核苷酸，其中所述vh包含与seq id no:7所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

24.如权利要求16至23中任一项所述的多核苷酸，其中所述vh包含seq id no:7所示的氨基酸序列。

25.如权利要求16至24中任一项所述的多核苷酸，其中所述vl包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

26.如权利要求16至25中任一项所述的多核苷酸，其中所述vl包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

27.如权利要求16至26中任一项所述的多核苷酸，其中所述vh包含seq id no:7所示的氨基酸序列，并且其中所述vl包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

28.如权利要求16至27中任一项所述的多核苷酸，其中所述car还包含(i)铰链区，(ii)跨膜结构域，(iii)共刺激结构域，(iv)细胞内信号传导结构域，或(v)其任何组合。

29.如权利要求16至28中任一项所述的多核苷酸，其中所述car还包含(i)铰链区，(ii)跨膜结构域，(iii)共刺激结构域，以及(iv)细胞内信号传导结构域。

30.如权利要求28或29所述的多核苷酸，其中所述铰链区包括衍生自cd8、cd28或免疫球蛋白的铰链区。

31.如权利要求30所述的多核苷酸，其中所述免疫球蛋白选自由以下组成的组：iga1、iga2、igg1、igg2、igg3、igg4、igd、ige、igm以及其任何组合。

32.如权利要求28至31中任一项所述的多核苷酸，其中所述铰链区衍生自cd8铰链区。

33.如权利要求28至32中任一项所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含与seq id no:9所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

34.如权利要求28至33中任一项所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含seq id no:9所示的氨基酸序列。

35.如权利要求28至34中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包括衍生自以下的跨膜结构域：cd8、kirds2、ox40、cd2、cd4、cd28、cd45、pd1、cd152、cd27、lfa-1(cd11a、cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd40、baffr、hvem(lightr)、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd160、cd19、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga1、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、tnfr2、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、slamf6(ntb-a、ly108)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、pag/cbp、nkg2d、nkg2c、cd19或其任何组合。

36.如权利要求28至35中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域衍生自cd8跨膜结构域。

37.如权利要求28至36中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含与seq idno:10所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

38.如权利要求28至37中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含seq idno:10所示的氨基酸序列。

39.如权利要求28至38中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激结构域包括衍生自以下的共刺激结构域的共刺激结构域：4-1bb/cd137、白细胞介素2受体(il-2r)、白细胞介素12受体(il-12r)、il-7、il-21、il-23、il-15、cd2、cd3、cd4、cd7、cd8、cd27、cd28、cd30、cd40、icos、淋巴细胞功能相关抗原-1(lfa-1)、light、nkg2c、ox40、dap10、b7-h3、因lck结合而缺失的cd28(ica)、btla、gitr、hvem、lfa-1、light、nkg2c、pd-1、tilr2、tilr4、tilr7、tilr9、fc受体γ链、fc受体ε链、与cd83特异性结合的配体或其任何组合。

40.如权利要求28至39中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激结构域衍生自4-1bb共刺激结构域。

41.如权利要求28至40中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激结构域包含与seqid no:11所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

42.如权利要求28至41中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激结构域包含seq idno:11所示的氨基酸序列。

43.如权利要求28至42中任一项所述的多核苷酸，其中所述细胞内信号传导结构域包含cd3ζ活化结构域、cd3δ活化结构域、cd3ε活化结构域、cd3η活化结构域、cd79a活化结构域、dap 12活化结构域、fcer1g活化结构域、dap10/cd28活化结构域、zap70活化结构域或其任何组合。

44.如权利要求28至43中任一项所述的多核苷酸，其中所述细胞内信号传导结构域包含cd3ζ活化结构域。

45.如权利要求28至44中任一项所述的多核苷酸，其中所述细胞内信号传导结构域包含与seq id no:12所示的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

46.如权利要求28至45中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激结构域包含seq idno:12所示的氨基酸序列。

47.如权利要求16至46中任一项所述的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列，其中所述car包含

48.如权利要求16至47中任一项所述的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列，其中所述car包含

49.如权利要求16至48中任一项所述的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列，其中所述car包含

50.如权利要求16至48中任一项所述的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列，其中所述car包含

51.如权利要求16至50中任一项所述的多核苷酸，其还包含编码装甲蛋白的第二核苷酸序列。

52.如权利要求51所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15rβ多肽、il-15rα多肽、il-2rβ多肽、il-15多肽或其任何组合。

53.如权利要求51或52所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-2rβ多肽。

54.如权利要求51至53中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含与seq idno:15所示的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

55.如权利要求51至54中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含seq id no:15所示的氨基酸序列。

56.如权利要求51至55中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-2rβ多肽，并且其中所述装甲蛋白不包含il-15rα多肽或il-15多肽。

57.如权利要求51至55中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含(i)il-15rα多肽或(ii)拴系至il-15多肽的il-15rα多肽。

58.如权利要求51至55和57中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15rα多肽，所述il-15rα多肽包含与seq id no:17所示的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

59.如权利要求51至55、57和58中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15rα多肽，所述il-15rα多肽包含seq id no:17所示的氨基酸序列。

60.如权利要求51至55和57至59中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15多肽。

61.如权利要求51至55和57至60中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15多肽，所述il-15多肽包含与seq id no:16所示的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

62.如权利要求51至55和57至61中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含il-15多肽，所述il-15多肽包含seq id no:16所示的氨基酸序列。

63.如权利要求51至55和57至62中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含通过接头拴系至il-15多肽的il-15rα多肽。

64.如权利要求63所述的多核苷酸，其中所述接头包含肽键。

65.如权利要求63或64所述的多核苷酸，其中所述接头包含gly-ser接头。

66.如权利要求63至65中任一项所述的多核苷酸，其中所述接头包含选自seq id no:20-25或其任何组合的氨基酸序列。

67.如权利要求51至52和57至60中任一项所述的多核苷酸，其中所述装甲蛋白包含(i)il-2rβ多肽；(ii)可切割接头；以及(iii)拴系至il-15多肽的il-15rα多肽。

68.如权利要求67所述的多核苷酸，其中所述可切割接头包含p2a序列。

69.如权利要求67或68所述的多核苷酸，其中所述可切割接头包含与seq id no:18所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。

70.如权利要求67至69中任一项所述的多核苷酸，其中所述可切割接头包含seq idno:18所示的氨基酸序列。

71.如权利要求16至70中任一项所述的多核苷酸，其包含编码以下的核苷酸序列：

72.如权利要求16至71中任一项所述的多核苷酸，其包含编码以下的核苷酸序列：

73.如权利要求71或72所述的多核苷酸，其不包含编码il-15rα多肽或il-15多肽的核苷酸序列。

74.如权利要求16至55和57至72中任一项所述的多核苷酸，其包含编码以下的核苷酸序列：

75.如权利要求16至55和57至72中任一项所述的多核苷酸，其包含编码以下的核苷酸序列：

76.一种载体或载体集合，其包含如权利要求16至75中任一项所述的多核苷酸。

77.如权利要求76所述的载体或载体集合，其包含一个或多个启动子。

78.如权利要求76或77所述的载体或载体集合，其为逆转录病毒载体、dna载体、鼠白血病病毒载体、sfg载体、质粒、rna载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、eb病毒载体、乳多空病毒载体、痘苗病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体(aav)、慢病毒载体或其任何组合。

79.一种多肽，其由如权利要求16至75中任一项所述的多核苷酸编码。

80.一种宿主细胞，其包含如权利要求16至75中任一项所述的多核苷酸、如权利要求76至78中任一项所述的载体或载体集合，或如权利要求79所述的多肽。

81.如权利要求80所述的宿主细胞，其为免疫细胞。

82.如权利要求81所述的宿主细胞，其中所述免疫细胞是先天性淋巴样细胞。

83.如权利要求81或82所述的宿主细胞，其中所述免疫细胞选自t细胞、nk细胞、b细胞或其任何组合。

84.如权利要求83所述的宿主细胞，其中所述t细胞选自γδt细胞、αβt细胞或其任何组合。

85.如权利要求83或84所述的宿主细胞，其中所述t细胞选自vδ1t细胞和vδ2t细胞。

86.如权利要求80至85中任一项所述的宿主细胞，其获自人受试者。

87.如权利要求80至86中任一项所述的宿主细胞，其获自：获自人受试者的血液样品、获自人受试者的皮肤样品、获自人受试者的肿瘤样品、获自人受试者的肠组织样品或其任何组合。

88.如权利要求80至86中任一项所述的宿主细胞，其衍生自诱导性多能干细胞(ipsc)。

89.一种细胞群，其包含如权利要求80至88中任一项所述的宿主细胞。

90.如权利要求89所述的细胞群，其中所述细胞群中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的细胞总数包含所述宿主细胞。

91.一种药物组合物，其包含如权利要求16至75中任一项所述的多核苷酸、如权利要求76至78中任一项所述的载体或载体集合、如权利要求79所述的多肽、如权利要求80至88中任一项所述的宿主细胞或如权利要求89或90所述的细胞群以及药学上可接受的赋形剂。

92.一种治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，其包括向所述受试者施用如权利要求16至75中任一项所述的多核苷酸、如权利要求76至78中任一项所述的载体或载体集合、如权利要求79所述的多肽、如权利要求80至88中任一项所述的宿主细胞、如权利要求89或90所述的细胞群或如权利要求91所述的药物组合物。

93.如权利要求92所述的方法，其中所述疾病或病状包括癌症。

94.如权利要求93所述的方法，其中所述癌症包括肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、睪丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病(hodgkin's disease)、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)肿瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括石棉诱发的那些癌症)或其任何组合。

95.如权利要求93或94所述的方法，其中所述癌症包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、间皮瘤或其任何组合。

96.如权利要求93至94中任一项所述的方法，其中所述癌症是局部晚期的。

97.如权利要求93至95中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移的。

98.如权利要求92至97中任一项所述的方法，其中所述癌症是难治的或复发的。

99.如权利要求92至98中任一项所述的方法，其还包括施用另外的抗癌剂。

100.如权利要求99所述的方法，其中所述另外的抗癌疗法包括化学疗法、免疫疗法、放射疗法、手术或其任何组合。

101.如权利要求99或100所述的方法，其中所述另外的抗癌疗法包括化学疗法。

102.如权利要求99至101中任一项所述的方法，其中所述另外的抗癌疗法包括免疫检查点抑制剂。

103.如权利要求98至101中任一项所述的方法，其中所述另外的抗癌疗法包括pd-1拮抗剂、pd-l1拮抗剂、ctla-4拮抗剂、lag-3拮抗剂、gitr拮抗剂或其任何组合。

104.如权利要求99至103中任一项所述的方法，其中所述抗癌疗法包括特异性结合并抑制pd-1的抗体或其抗原结合部分。

105.如权利要求99至104中任一项所述的方法，其中所述抗癌疗法包括特异性结合并抑制pd-l1的抗体或其抗原结合部分。