一种apoA-I抗糖功能突变体及其制备方法和应用

本发明属于糖尿病心血管病变治疗领域，特别涉及一种apoa-i抗糖功能突变体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、2023年8月，欧洲心脏病协会(esc)发布的《2023年欧洲心脏病协会(esc)关于糖尿病心血管疾病管理的指南》，开创“糖尿病心脏病学”元年。根据指南，他汀类药物或者pcsk9抑制剂或抑制ldl-c合成或促进ldl-c降解，是动脉粥样硬化治疗的基石。值得注意的是，无论他汀类或者pcsk9抑制剂，都是以降低ldl-c这个心血管危险因素为出发点。事实上，除了降低血清总胆固醇(tc)和低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平外，还可以通过升高心血管保护因素——高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)来使冠心病患者获益。一项大规模荟萃研究显示，在接受他汀类药物治疗的患者中，即使其低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平很低，hdl-c和apoa-i(hdl主要功能蛋白成分)水平依然独立于ldl-c与心血管风险紧密相关，其中apoa-i水平上升还能够促使主要心血管事件风险降低。这些发现表明，升高血浆载脂蛋白a-i水平或可作为他汀或pcsk9的补充疗法，通过协同作用，进一步改善患者血脂。

2、hdl(高密度脂蛋白)是唯一确认的心血管保护因子，载脂蛋白apoa-i占hdl蛋白含量的70％以上，是hdl功能的执行者，发挥了维持胆固醇稳态，促进胆固醇逆转运，抗炎，抗氧化和抗动脉粥样硬化等心血管保护功能。但在糖尿病时，hdl中最主要的蛋白成分apoa-i(约占整个hdl蛋白成分的70％以上)会发生非酶糖基化修饰，不但导致hdl丧失其保护正常功能，甚至表现出促进动脉粥样硬化的负性效应。目前国内外对于apoa-i非酶糖化修饰了解寥寥，以抗糖为目标，针对糖尿病患者心血管病变干预的apoa-i改造更是绝无仅有。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种apoa-i抗糖功能突变体及其制备方法和应用，该突变体具有绝佳的抗糖特性和生物安全性，能显著改善糖尿病小鼠血脂，降低肝脏异位脂肪沉积和抑制动脉粥样斑块的形成，具有良好的市场应用前景。

2、本发明提供了一种apoa-i抗糖功能突变体，通过构建apoae125c/e136c重组蛋白并交联成二聚体而得。

3、进一步的，所述apoae125c/e136c重组蛋白对应于天然apoa-i氨基酸序列中125、136位置的氨基酸并非谷氨酸，而是半胱氨酸，如seq id no:1所示。

4、进一步的，所述交联是指利用交联剂在apoae125c/e136c重组蛋白a的125位半胱氨酸和apoae125c/e136c重组蛋白b的136位半胱氨酸形成硫醚键交联。

5、进一步的，所述交联剂为双马来酰亚胺基己烷。

6、本发明还提供了一种apoa-i抗糖功能突变体的制备方法，包括如下步骤：

7、(1)将含有apoae125c/e136c重组蛋白的质粒转化到感受态细胞中，随后进行表达和纯化；

8、(2)在apoae125c/e136c重组蛋白溶液加入交联剂进行交联，得到apoa-i抗糖功能突变体。

9、本发明还提供了一种如权利要求1所述的apoa-i抗糖功能突变体在制备糖尿病心血管病变治疗药物中的应用。

10、进一步的，所述药物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。

11、进一步的，所述药学上可接受的载体和/或辅料包括稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂中的至少一种。

12、有益效果

13、本发明的apoa-i抗糖功能突变体具有绝佳的抗糖特性和生物安全性，能显著改善糖尿病小鼠血脂，降低肝脏异位脂肪沉积和抑制动脉粥样斑块的形成，具有良好的市场应用前景。

1.一种apoa-i抗糖功能突变体，其特征在于：通过构建apoae125c/e136c重组蛋白并交联成二聚体而得。

2.根据权利要求1所述的apoa-i抗糖功能突变体，其特征在于：所述apoae125c/e136c重组蛋白对应于天然apoa-i氨基酸序列中125、136位置的氨基酸并非谷氨酸，而是半胱氨酸，如seq id no:1所示。

3.根据权利要求1所述的apoa-i抗糖功能突变体，其特征在于：所述交联是指利用交联剂在apoae125c/e136c重组蛋白a的125位半胱氨酸和apoae125c/e136c重组蛋白b的136位半胱氨酸形成硫醚键交联。

4.根据权利要求3所述的apoa-i抗糖功能突变体，其特征在于：所述交联剂为双马来酰亚胺基己烷。

5.一种apoa-i抗糖功能突变体的制备方法，包括如下步骤：

6.一种如权利要求1所述的apoa-i抗糖功能突变体在制备糖尿病心血管病变治疗药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述药物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述药学上可接受的载体和/或辅料包括稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂中的至少一种。