高DOPA含量的重组贻贝粘蛋白及其制备方法与流程

本发明涉及生物，尤其是涉及一种高dopa含量的重组贻贝粘蛋白及其制备方法。

背景技术：

1、贻贝是一种广泛分布于沿海和近海的甲壳类海洋生物，其足丝腺能分泌足丝，并通过足丝形成的足丝盘将贻贝固定在各种基材表面，研究表明，这与贻贝分泌的足丝有关。其足丝的主要成分为贻贝足丝蛋白(mytilus edulis foot protein，mfp)，也称为贻贝粘蛋白(mussel adhesive protein，map)，该蛋白具有高强度、高韧性和防水性。贻贝粘蛋白所形成的涂层具有多功能性，对多级别材料均能实现表面改性。贻贝粘蛋白还具有耐腐蚀性强、生物相容性良好、不会产生免疫反应等特点，在海洋工程、生物医学及表面化学等领域具有广泛的应用前景。

2、目前现有技术的缺点有一下两点：

3、其一，现有贻贝粘蛋白产品主要是从贻贝足丝腺体中提取获得的天然粘附蛋白，但由于贻贝粘附蛋白的分泌量很低，提取1g粘附蛋白大约需要30000只贻贝；或采用基因工程法制备重组贻贝粘蛋白，但该方法存在环境不友好、破坏生物多样性、破坏环境稳态、产率较低、纯化量低且纯化工艺复杂等缺陷，进而造成制备贻贝粘蛋白纯品的效率及产量均较低，极大的限制了贻贝粘蛋白的应用。

4、其二、目前市场上主流的贻贝粘蛋白重组产品多为非酪氨酸酶活化产品，不具有天然活性。或与天然贻贝粘蛋白同源性极差，不能完全实现天然贻贝粘蛋白的功能。

5、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种重组贻贝粘蛋白，以解决上述问题。

2、本发明的第二目的在于提供一种核酸分子。

3、本发明的第三目的在于提供一种载体。

4、本发明的第四目的在于提供一种细胞。

5、本发明的第五目的在于提供一种高dopa含量的重组贻贝粘蛋白的制备方法。

6、为了实现以上目的，特采用以下技术方案：

7、第一方面，本发明提供了一种重组贻贝粘蛋白，所述重组贻贝粘蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

8、第二方面，本发明提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码所述的重组贻贝粘蛋白。

9、作为进一步技术方案，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no.2所示。

10、第三方面，本发明提供了一种载体，所述载体携带所述的核酸分子。

11、作为进一步技术方案，所述载体包括ppicza载体。

12、第四方面，本发明提供了一种细胞，所述细胞携带所述的核酸分子，或者含有所述的载体，或者表达所述的重组贻贝粘蛋白。

13、作为进一步技术方案，所述细胞包括毕赤酵母。

14、第五方面，本发明提供了一种高dopa含量的重组贻贝粘蛋白的制备方法，包括：利用所述的细胞表达所述重组贻贝粘蛋白，然后经分离纯化和酪氨酸酶活化后制备得到所述重组贻贝粘蛋白。

15、作为进一步技术方案，所述活化为采用活化液处理；

16、所述活化液包括缓冲液，所述缓冲液中包括浓度为20mm的硼酸钠、浓度为25mm的抗坏血酸，以及酪氨酸酶；

17、所述缓冲液包括pbs缓冲液，ph为6-7。

18、作为进一步技术方案，所述酪氨酸酶和重组贻贝粘蛋白的质量比为1：(1600-2400)；

19、所述活化的时间为1-3h。

20、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

21、本发明提供的重组贻贝粘蛋白，与天然形式存在的贻贝粘蛋白(mfp)具有高度一致性，序列同源性高达90％以上。该重组贻贝粘蛋白经酪氨酸酶活化后，dopa含量在3％以上(dopa含量越高，重组贻贝粘蛋白的价值越高)，具有天然活性，有助于从根源上解决对贻贝的屠杀现象，保护生物多样性。

1.一种重组贻贝粘蛋白，其特征在于，所述重组贻贝粘蛋白的氨基酸序列如seq idno.1所示。

2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的重组贻贝粘蛋白。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如seq idno.2所示。

4.一种载体，其特征在于，所述载体携带权利要求2或3所述的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体包括ppicza载体。

6.一种细胞，其特征在于，所述细胞携带权利要求2或3所述的核酸分子，或者含有权利要求4或5所述的载体，或者表达权利要求1所述的重组贻贝粘蛋白。

7.根据权利要求6所述的细胞，其特征在于，所述细胞包括毕赤酵母。

8.一种高dopa含量的重组贻贝粘蛋白的制备方法，其特征在于，包括：利用权利要求6或7所述的细胞表达所述重组贻贝粘蛋白，然后经分离纯化和酪氨酸酶活化后制备得到所述重组贻贝粘蛋白。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述活化为采用活化液处理；

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述酪氨酸酶和重组贻贝粘蛋白的质量比为1：(1600-2400)；