浓缩血小板制品、生产工艺、血小板保存液及储存方法与流程

本发明属于生物，具体涉及浓缩血小板制品、生产工艺、血小板保存液及储存方法。

背景技术：

1、血小板(blood platelet，plt)是血液主成份之一，主要功能是凝血和止血，修补破损的血管。plt是巨核细胞成熟后脱颗粒释放到血液中的血细胞，形状多样不规则，直径1～4μm到7～8μm不等，且个体差异很大(5～12立方微米)，无细胞核。plt在血液中是与其他细胞混合存在的，常成群分布在红细胞之间。根据《全血及成分血质量要求》(gb 18469)中对浓缩血小板质量要求红细胞混入量必须≤2.0×109个(来源于400ml全血)，传统制备浓缩血小板为了达到要求，会降低血小板收率，因此研究高纯度、高收率分离制备血小板工艺非常必要。

2、目前国内绝大部分血站使用的浓缩血小板制品是用血浆保存，血浆中含有抗原、抗体、凝血酶等异体蛋白。在输血过程中常会引起患者引发发热、过敏等变态反应，因此，进一步研究可替代血浆使用的血小板保存液是极其必要的。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的上述缺陷，本申请首先提供一种浓缩血小板制品生产工艺，制备得到的浓缩血小板纯度高、收率好、稳定性强、保存时间长。本申请另一方面提供了用于保存浓缩血小板的保存液和血小板的储存方法，可以长期维持血小板保存的稳定性，提高保存期间血小板质量和减轻血小板保存期损伤。

2、为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

3、本申请第一方面提供一种浓缩血小板制品生产工艺，包括：

4、s1：取新鲜抗凝全血并振摇解聚；

5、s2：对振摇解聚后的全血进行轻离心，得到上层富血小板血浆ⅰ和下层血细胞ⅰ；

6、s3：对所述下层血细胞ⅰ进行梯度离心，得到含白膜层、血浆及少量红细胞的上层及下层红细胞ⅱ；

7、s4：对所述含白膜层、血浆及少量红细胞的上层进行梯度离心，得到富血小板血浆ⅱ和和下层红细胞ⅲ；

8、s5：将所述富血小板血浆ⅰ和富血小板血浆ⅱ合并后得到混合富血小板血浆ⅰ；

9、s6：对所述混合富血小板血浆ⅰ进行离心，得到上层混合富血小板血浆ⅱ和下层红细胞ⅳ；

10、s7：对所述上层混合富血小板血浆ⅱ进行离心，得到上层血浆和下层血小板ⅴ；

11、s8：向血小板v加入一定量血浆或血小板保存液后，即得浓缩血小板制品。

12、在本发明一些实施例中，所述新鲜抗凝全血是从人或动物采集新鲜血液并加入抗凝剂制得。

13、在本发明一些实施例中，所述振摇解聚的条件为20-24℃，时间20-40min。

14、在本发明一些实施例中，所述步骤s2中轻离心的具体条件为：150-250g，15-20min；所述步骤s3中梯度离心的条件为：440-470g，6-8min；2400-2700g，4-6min；所述步骤s4中梯度离心的条件为：260-320g，5-7min；450-500g，5-7min。

15、在本发明一些实施例中，所述步骤s6中离心条件为：350-430g，5-7min；所述步骤s7中离心条件为：2250-2750g，15-20min。

16、在本发明一些实施例中，所述血小板保存液的成分和浓度为：氯化钠75-85mmol/l、氯化钾4-5mmol/l、氯化镁1-3mmol/l、醋酸钠20-24mmol/l、氯化钙1-2mmol/l、柠檬酸3-5mmol/l、碳酸氢钠43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、柠檬酸钠9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。

17、本申请第二方面提供以上任一所述的生产工艺制备得到的浓缩血小板制品。

18、在本发明一些实施例中，所述的浓缩血小板制品的血小板浓度为：800-1400e9/l。

19、本申请第三方面提供一种血小板保存液，所述血小板保存液的成分和浓度为：氯化钠75-85mmol/l、氯化钾4-5mmol/l、氯化镁1-3mmol/l、醋酸钠20-24mmol/l、氯化钙1-2mmol/l、柠檬酸3-5mmol/l、碳酸氢钠43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、柠檬酸钠9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。所述血小板保存液的ph值为7.2～7.4。

20、本申请第四方面提供一种血小板的储存方法，包括：将一定量的血小板与一定体积的所述血小板保存液混合，保存于22±2℃的恒温振荡箱中。

21、在本发明一些实施例中，所述血小板的储存方法还包括将所述血小板储存3-7天。

22、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

23、本发明提供一种浓缩血小板制品生产工艺中分离提取血小板的方法不仅可以提高收率，还可以提高纯度，得到的血小板保存在本发明所制备的血小板保存液中可以长期维持血小板保存的稳定性，提高保存期间血小板质量和减轻保存期损伤；

24、本发明提供了一种新型血小板保存液，能有效维持血小板稳定性，提高血小板质量和减轻保存期损伤，可以替代传统血浆保存血小板。血小板保存液中含有常作为血浆替代品的海藻糖，对人体安全无害，可被机体吸收和代谢。通过该保存液可以减少输血过程中不良反应发生几率，提高浓缩血小板活性和保存时间；

25、本发明提供的分离提取血小板的工艺得到的浓缩血小板制品，其纯度高、收率好、稳定性强、保存时间长，具有良好的应用前景。

1.一种浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，所述新鲜抗凝全血是从人或动物采集新鲜血液并加入抗凝剂制得。

3.根据权利要求1所述的浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，所述振摇解聚的温度条件为20-24℃，时间为20-40min。

4.根据权利要求1所述的浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，所述步骤s2中轻离心的具体条件为：150-250g，15-20min；所述步骤s3中梯度离心的条件为：440-470g，6-8min；2400-2700g，4-6min；所述步骤s4中梯度离心的条件为：260-320g，5-7min；450-500g，5-7min。

5.根据权利要求1所述的浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，所述步骤s6中离心条件为：350-430g，5-7min；所述步骤s7中离心条件为：2250-2750g，15-20min。

6.根据权利要求1所述的浓缩血小板制品生产工艺，其特征在于，所述血小板保存液的成分和浓度为：氯化钠75-85mmol/l、氯化钾4-5mmol/l、氯化镁1-3mmol/l、醋酸钠20-24mmol/l、氯化钙1-2mmol/l、柠檬酸3-5mmol/l、碳酸氢钠43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、柠檬酸钠9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。

7.权利要求1-6任一所述的生产工艺制备得到的浓缩血小板制品，所述的浓缩血小板制品的血小板浓度为：800-1400e9/l。

8.一种血小板保存液，其特征在于，所述血小板保存液的成分和浓度为：氯化钠75-85mmol/l、氯化钾4-5mmol/l、氯化镁1-3mmol/l、醋酸钠20-24mmol/l、氯化钙1-2mmol/l、柠檬酸3-5mmol/l、碳酸氢钠43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、柠檬酸钠9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l，所述血小板保存液的ph值为7.2～7.4。

9.一种血小板的储存方法，其特征在于，包括：将一定量的血小板与一定体积的血小板保存液混合，保存于22±2℃的恒温振荡箱中，所述血小板保存液为权利要求8所述的血小板保存液。

10.根据权利要求9所述的血小板的储存方法，其特征在于，还包括将所述血小板储存3-7天。