小球藻多糖提取优化的方法与流程

本发明涉及微生物，尤其涉及小球藻多糖提取优化的方法。

背景技术：

1、小球藻本身含有丰富的营养素：蛋白质、脂类、碳水化合物、矿物质、维生素、膳食纤维以及各种氨基酸等。研究表明，小球藻提取物具有增强机体免疫力、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，其中小球藻多糖的提取及应用研究也引起了许多研究者的关注。在已发布的小球藻多糖活性研究结果表明，小球藻多糖具有良好的抗氧化、抗炎、抗癌活性，同时，在维护肠道健康也具有重要作用。目前市场上小球藻多糖的多应用于食品添加剂、动物饲料、美容以及医药保健等领域。

2、传统提取方法对微藻多糖的提取率相对一般，许多文献的研究结果也显示碱提取法、热水提取法、超声破碎提取法及反复冻融提取法等方法的提取效果平平，实验考虑到以经济提取为本，因此，急需研究一种小球藻多糖提取优化的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供小球藻多糖提取优化的方法，旨在经济提取微藻多糖。

2、为实现上述目的，本发明提供了小球藻多糖提取优化的方法，包括以下步骤：

3、通过碱提取法、热水浴提取法、超声破碎提取法和反复冻融提取法分别对小球藻多糖进行提取，得到单组体系多糖；

4、选取碱提取法、热水浴提取法、超声破碎提取法和反复冻融提取法中任意两项对小球藻多糖进行提取，得到组合体系多糖；

5、利用蒽酮硫酸法测定所述单组体系多糖和所述组合体系多糖，并根据测定数据分析多糖含量最多的提取方法。

6、其中，所述碱提取法包括将小球藻藻粉悬浮在naoh的溶液中，震荡混匀，离心，收集上清液，得到单组体系多糖；所述热水浴提取法包括将小球藻藻粉悬浮在nacl溶液中，震荡混匀，再水浴提取，离心，收集上清液，得到单组体系多糖；所述超声破碎提取法包括将小球藻藻粉悬浮在nacl的溶液中，震荡混匀，超声提取，离心，收集上清液，得到单组体系多糖；所述反复冻融提取法包括将小球藻藻粉悬浮在nacl的溶液中，震荡混匀，将混悬液放入冰箱中冰冻，取出将其融化，重复冻融3次，离心，收集上清液，得到单组体系多糖。

7、其中，所述碱提取法和所述反复冻融提取法组合包括将小球藻藻粉悬浮在naoh的溶液中，震荡混匀，置于恒温摇床震荡提取，将处理后的混合液放入冰箱中冰冻，取出将其融化，重复冻融3次，离心，收集上清液，得到组合体系多糖；所述碱提取法和所述热水浴提取法组合包括将小球藻藻粉悬浮在naoh的溶液中，震荡混匀，置于恒温摇床震荡提取，而后再水浴提取，离心，收集上清液，得到组合体系多糖；所述碱提取法和所述超声破碎提取法组合包括将小球藻粉末悬浮在naoh的溶液中，震荡混匀，置于恒温摇床震荡提取，超声提取，离心，收集上清液，得到组合体系多糖；所述复冻融提取法和所述热水浴提取法包括将小球藻粉末悬浮在nacl的溶液中，震荡混匀，放入冰箱中冰冻，取出将其融化，重复冻融3次，解冻后再水浴提取，离心，收集上清液，得到组合体系多糖；所述反复冻融提取法和所述超声破碎提取法组合包括将小球藻粉末悬浮在nacl的溶液中，震荡混匀，放入冰箱中，取出将其融化，重复冻融3次，超声提取，离心，收集上清液，得到组合体系多糖；所述热水浴提取法和所述超声破碎提取法组合包括将小球藻粉末悬浮在nacl的溶液中，震荡混匀，再水浴提取，冷却至室温，超声提取，离心，收集上清液，得到组合体系多糖。

8、其中，所述利用蒽酮硫酸法测定所述单组体系多糖和所述组合体系多糖的具体方式：

9、将所述单组体系多糖稀释，加入蒽酮-硫酸试剂，震荡混匀，冷却至室温后置于水浴，冰水冷却至室温，利用酶标仪测定od620nm的吸光值，最后根据葡萄糖标准曲线方程计算小球藻多糖浓度；

10、将所述组合体系多糖稀释，加入蒽酮-硫酸试剂，震荡混匀，冷却至室温后置于水浴，冰水冷却至室温，利用酶标仪测定od620nm的吸光值，最后根据葡萄糖标准曲线方程计算小球藻多糖浓度。

11、其中，所述蒽酮-硫酸试剂需现配现用。

12、本发明的小球藻多糖提取优化的方法，通过碱提取法、热水浴提取法、超声破碎提取法和反复冻融提取法分别对小球藻多糖进行提取，得到单组体系多糖，选取碱提取法、热水浴提取法、超声破碎提取法和反复冻融提取法中任意两项对小球藻多糖进行提取，得到组合体系多糖；利用蒽酮硫酸法测定所述单组体系多糖和所述组合体系多糖，并根据测定数据分析多糖含量最多的提取方法，该方法以单组体系作为实验对照，两两组合体系为主要实验对象，对小球藻多糖的提取率进行了实验研究，并用蒽酮硫酸法测定小球藻多糖的含量，结果显示当用组合方法提取小球藻多糖时，提取率有所提高，表明选择组合体系提取多糖更优于单组提取，实现了经济提取的优点，具有很好的实践价值。

1.小球藻多糖提取优化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的小球藻多糖提取优化的方法，其特征在于，

3.如权利要求1所述的小球藻多糖提取优化的方法，其特征在于，

4.如权利要求1所述的小球藻多糖提取优化的方法，其特征在于，

5.如权利要求4所述的小球藻多糖提取优化的方法，其特征在于，