支气管败血波氏杆菌弱毒株HN60及其应用的制作方法

本发明属于生物制药，具体提供一种支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60及其应用。

背景技术：

1、犬传染性气管支气管炎(犬窝咳)是狗的一种重要疾病，常在犬集中饲养的群体中如养犬场、流浪犬收容中心、宠物店和宠物医院的犬群中发生和流行。由支气管败血波氏杆菌(bordetella bronchiseptica，bb)感染引起。本病不同品种、不同性别和不同年龄的犬都可感染,但以幼龄犬最为敏感、危害更为严重。临床上以阵发性咳嗽，气管支气管炎和鼻炎等为主要特征。

2、支气管败血波氏杆菌最早是从患有犬瘟热的犬呼吸道中分离，是一种革兰氏阴性球杆菌，属于波氏杆菌属，该菌可感染多种哺乳动物，引起猪萎缩性鼻炎、肺炎及兔子、豚鼠的支气管肺炎，还可引发猫、老鼠和马的呼吸道感染。对犬具有高度传染性，犬之间易通过直接接触传播。

3、支气管败血波氏杆菌在鲍姜氏血平板上生长存在4种表型，分别为ⅰ相菌、ⅱ相菌、ⅲ相菌和粗糙型菌。ⅰ相菌在鲍姜氏血平板菌落形态为珍珠样小菌落，有的菌株具有溶血性，表达一系列的毒力因子，ⅲ相菌在鲍姜氏血平板菌落形态为灰白色扁平的大菌落，不溶血，不表达相应的毒力因子。研究证明ⅰ相菌株为强毒株，其他变异型菌株为弱毒株。

4、疫苗接种在预防传染性犬气管支气管炎疾病中发挥着重要作用。本发明选取国内分离的支气管败血波氏杆菌野毒株进行培育，得到1株弱化毒株，对犬传染性气管支气管炎有着积极预防和高效控制的作用。

5、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60。

2、本发明的第二目的在于提供上述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60的应用。

3、本发明的第三目的在于提供一种疫苗。

4、本发明的第四目的在于提供上述疫苗的制备方法。

5、本发明的第五目的在于提供一种支气管败血波氏杆菌强毒株hn03。

6、本发明的第六目的在于提供上述支气管败血波氏杆菌强毒株hn03的应用。

7、为了实现上述目的，本发明特采用如下技术方案：

8、一种支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60，保藏号为cctccno:m20221719，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年11月3日。

9、上述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物在制备预防支气管败血波氏杆菌感染的药物中的应用。

10、进一步地，该药物为疫苗。

11、优选地，药物对象为犬或猫。

12、一种疫苗，该疫苗包括免疫有效量的支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物，以及药学上可接受的辅料。

13、进一步地，该支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为≥1×106cfu/头份；优选地，该支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为1×106～1×1010cfu/头份；进一步优选为该支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为1×109cfu/头份。

14、进一步地，该支气管败血波氏杆菌hn60培养物为1～60代次的培养物。

15、进一步地，该药学上可接受的辅料为冻干保护剂，该冻干保护剂包括spga、糖类、明胶、蛋白质、含有蛋白质的物质或/和缓冲液。

16、优选地，糖类选自山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖或葡聚糖；蛋白质选自白蛋白或酪蛋白；含有蛋白质的物质为牛血清或脱脂乳；缓冲液为磷酸盐缓冲液。

17、优选地，该冻干保护剂为20w/v％蔗糖和2w/v％明胶。

18、优选地，支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物与药学上可接受的辅料的体积比1:1。

19、该疫苗的制备方法，将支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物与药学上可接受的辅料混匀，得到疫苗。

20、一种支气管败血波氏杆菌强毒株hn03，该支气管败血波氏杆菌强毒株hn03与支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60同源，保藏号为cctccno:m20221718，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年11月3日。

21、该支气管败血波氏杆菌强毒株hn03在检验支气管败血波氏杆菌疫苗的效力中的应用。

22、与现有技术相比，本发明的技术效果为：

23、本发明选取国内分离的支气管败血波氏杆菌野毒株hn03进行培育，得到1株弱化毒株hn60，其具有稳定的生物学特性，且具有良好的免疫原性，安全可靠，对犬传染性气管支气管炎有着积极预防和高效控制的作用。

1.一种支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60，其特征在于，保藏号为cctccno:m20221719，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年11月3日。

2.权利要求1所述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物在制备预防支气管败血波氏杆菌感染的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为疫苗；

4.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗包括免疫有效量的权利要求1所述的支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物，以及药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为≥1×106cfu/头份；优选地，所述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为1×106～1×1010cfu/头份；进一步优选为所述支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60含量为1×109cfu/头份。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述支气管败血波氏杆菌hn60培养物为1～60代次的培养物。

7.根据权利要求4～6任一项所述的疫苗，其特征在于，所述药学上可接受的辅料为冻干保护剂，所述冻干保护剂包括spga、糖类、明胶、蛋白质、含有蛋白质的物质或/和缓冲液；

8.权利要求4～7任一项所述的疫苗的制备方法，其特征在于，将支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60或其培养物与药学上可接受的辅料混匀，得到疫苗。

9.一种支气管败血波氏杆菌强毒株hn03，其特征在于，所述支气管败血波氏杆菌强毒株hn03与支气管败血波氏杆菌弱毒株hn60同源，保藏号为cctccno:m20221718，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年11月3日。

10.权利要求8所述的支气管败血波氏杆菌强毒株hn03在检验支气管败血波氏杆菌疫苗的效力中的应用。